中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2005年
2期
140-144
,共5页
王宝琴%张永光%王小龙%王永录%潘丽%王文秀%董金杰%吕建亮
王寶琴%張永光%王小龍%王永錄%潘麗%王文秀%董金傑%呂建亮
왕보금%장영광%왕소룡%왕영록%반려%왕문수%동금걸%려건량
口蹄疫病毒%表达%烟草%免疫%抗体%Balb/C小白鼠
口蹄疫病毒%錶達%煙草%免疫%抗體%Balb/C小白鼠
구제역병독%표체%연초%면역%항체%Balb/C소백서
通过三亲杂交法,构建克隆有阿克苏(Akesu/58)O型口蹄疫病毒vp1基因的双元表达载体pBin FMDV VP1.采用农杆菌介导法转化NC89烟草叶盘,经卡那霉素筛选,共获得49株抗性植株.对抗性植株总DNA进行目的基因的PCR检测,有40株阳性植株.对阳性植株总RNA进行目的基因的RT-PCR检测,有21株阳性植株.将7株ELISA和Western-blot检测阳性植株叶片提取物分别与弗氏佐剂乳化,在0、15、30和45d腹膜腔接种Balb/C小白鼠,于第4次免疫后第9d进行血清抗体检测;第12d用10 4SM\-\{50\}LD的同源强毒进行攻击;攻毒后24h采血,通过乳鼠病毒血症试验判定攻击Balb/C小白鼠的发病和保护情况.结果表明:双元表达载体pBin FMDV VP1构建正确;vp1基因转入NC89烟草并获得表达;7组中有2组Balb/C小白鼠血清抗体呈阳性,攻毒保护率分别为100%和63%.证明2株转基因烟草表达的VP1蛋白具有较好的免疫原性,所免疫的2组Balb/C小白鼠对同源强毒攻击有一定的抵抗能力.
通過三親雜交法,構建剋隆有阿剋囌(Akesu/58)O型口蹄疫病毒vp1基因的雙元錶達載體pBin FMDV VP1.採用農桿菌介導法轉化NC89煙草葉盤,經卡那黴素篩選,共穫得49株抗性植株.對抗性植株總DNA進行目的基因的PCR檢測,有40株暘性植株.對暘性植株總RNA進行目的基因的RT-PCR檢測,有21株暘性植株.將7株ELISA和Western-blot檢測暘性植株葉片提取物分彆與弗氏佐劑乳化,在0、15、30和45d腹膜腔接種Balb/C小白鼠,于第4次免疫後第9d進行血清抗體檢測;第12d用10 4SM\-\{50\}LD的同源彊毒進行攻擊;攻毒後24h採血,通過乳鼠病毒血癥試驗判定攻擊Balb/C小白鼠的髮病和保護情況.結果錶明:雙元錶達載體pBin FMDV VP1構建正確;vp1基因轉入NC89煙草併穫得錶達;7組中有2組Balb/C小白鼠血清抗體呈暘性,攻毒保護率分彆為100%和63%.證明2株轉基因煙草錶達的VP1蛋白具有較好的免疫原性,所免疫的2組Balb/C小白鼠對同源彊毒攻擊有一定的牴抗能力.
통과삼친잡교법,구건극륭유아극소(Akesu/58)O형구제역병독vp1기인적쌍원표체재체pBin FMDV VP1.채용농간균개도법전화NC89연초협반,경잡나매소사선,공획득49주항성식주.대항성식주총DNA진행목적기인적PCR검측,유40주양성식주.대양성식주총RNA진행목적기인적RT-PCR검측,유21주양성식주.장7주ELISA화Western-blot검측양성식주협편제취물분별여불씨좌제유화,재0、15、30화45d복막강접충Balb/C소백서,우제4차면역후제9d진행혈청항체검측;제12d용10 4SM\-\{50\}LD적동원강독진행공격;공독후24h채혈,통과유서병독혈증시험판정공격Balb/C소백서적발병화보호정황.결과표명:쌍원표체재체pBin FMDV VP1구건정학;vp1기인전입NC89연초병획득표체;7조중유2조Balb/C소백서혈청항체정양성,공독보호솔분별위100%화63%.증명2주전기인연초표체적VP1단백구유교호적면역원성,소면역적2조Balb/C소백서대동원강독공격유일정적저항능력.
