微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2006年
1期
43-47
,共5页
核盘菌%arom基因%基因表达%酿酒酵母
覈盤菌%arom基因%基因錶達%釀酒酵母
핵반균%arom기인%기인표체%양주효모
核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)arom基因已经被克隆、测序.该基因编码的AROM蛋白是芳香族氨基酸合成途径中催化第二步到第六步的五功能多肽.为了对扩增的核盘菌arom基因进行功能验证和探索大量获得AROM蛋白的成熟方法,克隆了arom基因的编码框序列,并将其与载体pYES2连接,构建了酵母表达载体pYES2-arom.用LiAc/SSDNA/PEG方法将该表达载体转入酿酒酵母H158(Saccharomyces cerevisiae H158)中.酶活测定、RT-PCR和Northern杂交结果显示,核盘菌arom基因在酿酒酵母胞内获得了表达,转化子具有AROM蛋白结构域之一5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶的催化活性.不同培养时间取样样品的酶活检测结果表明,当转化子在30℃的条件下,在SC-U酵母尿嘧啶营养缺陷型选择培养基中以180r/min被振荡培养时,其外源AROM蛋白的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶酶活在培养72h达到最高.
覈盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)arom基因已經被剋隆、測序.該基因編碼的AROM蛋白是芳香族氨基痠閤成途徑中催化第二步到第六步的五功能多肽.為瞭對擴增的覈盤菌arom基因進行功能驗證和探索大量穫得AROM蛋白的成熟方法,剋隆瞭arom基因的編碼框序列,併將其與載體pYES2連接,構建瞭酵母錶達載體pYES2-arom.用LiAc/SSDNA/PEG方法將該錶達載體轉入釀酒酵母H158(Saccharomyces cerevisiae H158)中.酶活測定、RT-PCR和Northern雜交結果顯示,覈盤菌arom基因在釀酒酵母胞內穫得瞭錶達,轉化子具有AROM蛋白結構域之一5-烯醇丙酮酰莽草痠-3-燐痠閤酶的催化活性.不同培養時間取樣樣品的酶活檢測結果錶明,噹轉化子在30℃的條件下,在SC-U酵母尿嘧啶營養缺陷型選擇培養基中以180r/min被振盪培養時,其外源AROM蛋白的5-烯醇丙酮酰莽草痠-3-燐痠閤酶酶活在培養72h達到最高.
핵반균(Sclerotinia sclerotiorum)arom기인이경피극륭、측서.해기인편마적AROM단백시방향족안기산합성도경중최화제이보도제륙보적오공능다태.위료대확증적핵반균arom기인진행공능험증화탐색대량획득AROM단백적성숙방법,극륭료arom기인적편마광서렬,병장기여재체pYES2련접,구건료효모표체재체pYES2-arom.용LiAc/SSDNA/PEG방법장해표체재체전입양주효모H158(Saccharomyces cerevisiae H158)중.매활측정、RT-PCR화Northern잡교결과현시,핵반균arom기인재양주효모포내획득료표체,전화자구유AROM단백결구역지일5-희순병동선망초산-3-린산합매적최화활성.불동배양시간취양양품적매활검측결과표명,당전화자재30℃적조건하,재SC-U효모뇨밀정영양결함형선택배양기중이180r/min피진탕배양시,기외원AROM단백적5-희순병동선망초산-3-린산합매매활재배양72h체도최고.
