临床和实验医学杂志
臨床和實驗醫學雜誌
림상화실험의학잡지
JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL MEDICINE
2008年
6期
17-19
,共3页
黄俊琼%张海峰%章春花%胡永林
黃俊瓊%張海峰%章春花%鬍永林
황준경%장해봉%장춘화%호영림
IL-31%重组腺病毒%构建%表达
IL-31%重組腺病毒%構建%錶達
IL-31%중조선병독%구건%표체
目的 构建并鉴定人白细胞介素31(IL-31)重组腺病毒Ad-IL-31,为下一步IL-31功能研究奠定基础.方法 以pGEM-T-IL-31为模板扩增IL-31基因,将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架质粒共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-31,经PacⅠ线性化后转染QBI-293A细胞,荧光显微镜下观察细胞内荧光,测定病毒效价,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(western blot)分析细胞内IL-31信使核糖核酸(mRNA)和蛋白质的表达.结果 经双酶切及基因扩增仪鉴定,重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见500 bp插入片段,测序结果和基因库中的基因序列一致;重组病毒效价为2.6×108 pfu/ml;重组病毒感染后,QBI-293A细胞中有IL-31mRNA和蛋白质表达.结论 成功构建IL-31重组腺病毒载体,并在QBI-293A细胞中表达,为进一步研究IL-31的功能奠定了基础.
目的 構建併鑒定人白細胞介素31(IL-31)重組腺病毒Ad-IL-31,為下一步IL-31功能研究奠定基礎.方法 以pGEM-T-IL-31為模闆擴增IL-31基因,將其剋隆到腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV,PmeⅠ線性化後與腺病毒骨架質粒共轉化BJ5183細菌,穫得重組腺病毒質粒pAd-IL-31,經PacⅠ線性化後轉染QBI-293A細胞,熒光顯微鏡下觀察細胞內熒光,測定病毒效價,逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和蛋白質印跡(western blot)分析細胞內IL-31信使覈糖覈痠(mRNA)和蛋白質的錶達.結果 經雙酶切及基因擴增儀鑒定,重組穿梭質粒和重組腺病毒質粒均見500 bp插入片段,測序結果和基因庫中的基因序列一緻;重組病毒效價為2.6×108 pfu/ml;重組病毒感染後,QBI-293A細胞中有IL-31mRNA和蛋白質錶達.結論 成功構建IL-31重組腺病毒載體,併在QBI-293A細胞中錶達,為進一步研究IL-31的功能奠定瞭基礎.
목적 구건병감정인백세포개소31(IL-31)중조선병독Ad-IL-31,위하일보IL-31공능연구전정기출.방법 이pGEM-T-IL-31위모판확증IL-31기인,장기극륭도선병독천사질립pAdTrack-CMV,PmeⅠ선성화후여선병독골가질립공전화BJ5183세균,획득중조선병독질립pAd-IL-31,경PacⅠ선성화후전염QBI-293A세포,형광현미경하관찰세포내형광,측정병독효개,역전록-취합매련반응(RT-PCR)화단백질인적(western blot)분석세포내IL-31신사핵당핵산(mRNA)화단백질적표체.결과 경쌍매절급기인확증의감정,중조천사질립화중조선병독질립균견500 bp삽입편단,측서결과화기인고중적기인서렬일치;중조병독효개위2.6×108 pfu/ml;중조병독감염후,QBI-293A세포중유IL-31mRNA화단백질표체.결론 성공구건IL-31중조선병독재체,병재QBI-293A세포중표체,위진일보연구IL-31적공능전정료기출.
