畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
6期
922-927
,共6页
刘琰%徐凝%付培芬%母晓宇%董井泉%马波%王君伟
劉琰%徐凝%付培芬%母曉宇%董井泉%馬波%王君偉
류염%서응%부배분%모효우%동정천%마파%왕군위
鸭肠炎病毒%gD%原核表达%噬斑减数中和试验%亚细胞定位
鴨腸炎病毒%gD%原覈錶達%噬斑減數中和試驗%亞細胞定位
압장염병독%gD%원핵표체%서반감수중화시험%아세포정위
以本实验室获得的鸭肠炎病毒(DEV) C-KCE株US区基因序列(GenBank登录号EU714267)为基础PCR扩增出gD基因胞外区(gDw),将其定向克隆至原核表达载体pET-30a(+)并转化至大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLys.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明gD基因胞外区在大肠杆菌中获得与预期大小相符的表达蛋白.重组蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,血清琼扩效价达1∶16,噬斑减数中和试验测定血清中和抗体效价达1∶64.通过免疫荧光技术首次对gD进行亚细胞定位检测,结果表明DEV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)后4h近核区域细胞质内首先开始出现荧光,12h以后显著增加,明显的点状绿色荧光广泛存在于胞质中.本研究为进一步开展DEV gD的功能研究提供了重要数据和材料.
以本實驗室穫得的鴨腸炎病毒(DEV) C-KCE株US區基因序列(GenBank登錄號EU714267)為基礎PCR擴增齣gD基因胞外區(gDw),將其定嚮剋隆至原覈錶達載體pET-30a(+)併轉化至大腸桿菌RosettaTM(DE3)pLys.經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE分析錶明gD基因胞外區在大腸桿菌中穫得與預期大小相符的錶達蛋白.重組蛋白純化後免疫傢兔製備多剋隆抗體,血清瓊擴效價達1∶16,噬斑減數中和試驗測定血清中和抗體效價達1∶64.通過免疫熒光技術首次對gD進行亞細胞定位檢測,結果錶明DEV感染鴨胚成纖維細胞(DEF)後4h近覈區域細胞質內首先開始齣現熒光,12h以後顯著增加,明顯的點狀綠色熒光廣汎存在于胞質中.本研究為進一步開展DEV gD的功能研究提供瞭重要數據和材料.
이본실험실획득적압장염병독(DEV) C-KCE주US구기인서렬(GenBank등록호EU714267)위기출PCR확증출gD기인포외구(gDw),장기정향극륭지원핵표체재체pET-30a(+)병전화지대장간균RosettaTM(DE3)pLys.경IPTG유도표체,SDS-PAGE분석표명gD기인포외구재대장간균중획득여예기대소상부적표체단백.중조단백순화후면역가토제비다극륭항체,혈청경확효개체1∶16,서반감수중화시험측정혈청중화항체효개체1∶64.통과면역형광기술수차대gD진행아세포정위검측,결과표명DEV감염압배성섬유세포(DEF)후4h근핵구역세포질내수선개시출현형광,12h이후현저증가,명현적점상록색형광엄범존재우포질중.본연구위진일보개전DEV gD적공능연구제공료중요수거화재료.
