CAJ | 학술논문

为了实现通过基因工程方法制备具有稳定结构的抗菌肽tachyplesin Ⅰ,采取了tachyplesinⅠ基因串联表达的方法.实验以高拷贝穿梭表达载体pSBPTQ为表达载体,通过RT-PCR扩增tachyplesin Ⅰ基因(tac)和采用直接退火的方法合成tachyplesin Ⅰ串联基因(2tac).构建重组表达载体pSBPTQ-TAC和pSBPTQ-2TAC,转化到枯草杆菌WB800实现高效表达,经2％蔗糖诱导获得表达串联产物(2TAC)和TAC.通过离子交换柱层析纯化后得表达产物2TAC和TAC,2TAC经BrCN水解后,对表达产物抑菌活性分析,观察发酵液上清对大肠杆菌(E.coli K88)和伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)的抑菌圈和细胞微观形态的变化.实验结果表明:基因tac和2tac在枯草杆菌中表达成功,表达产物在发酵上清液中的含量分别约为8.25、17.36 mg·L-1;表达产物TAC和2TAC对大肠杆菌K88和伤寒沙门氏菌都具有明显的抑菌作用,2TAC经BrCN水解产物抑菌活力高于TAC.
위료실현통과기인공정방법제비구유은정결구적항균태tachyplesin Ⅰ,채취료tachyplesinⅠ기인천련표체적방법.실험이고고패천사표체재체pSBPTQ위표체재체,통과RT-PCR확증tachyplesin Ⅰ기인(tac)화채용직접퇴화적방법합성tachyplesin Ⅰ천련기인(2tac).구건중조표체재체pSBPTQ-TAC화pSBPTQ-2TAC,전화도고초간균WB800실현고효표체,경2％자당유도획득표체천련산물(2TAC)화TAC.통과리자교환주층석순화후득표체산물2TAC화TAC,2TAC경BrCN수해후,대표체산물억균활성분석,관찰발효액상청대대장간균(E.coli K88)화상한사문씨균(Salmonella typhi)적억균권화세포미관형태적변화.실험결과표명:기인tac화2tac재고초간균중표체성공,표체산물재발효상청액중적함량분별약위8.25、17.36 mg·L-1;표체산물TAC화2TAC대대장간균K88화상한사문씨균도구유명현적억균작용,2TAC경BrCN수해산물억균활력고우TAC.