云南植物研究
雲南植物研究
운남식물연구
ACTA BOTANICA YUNNANICA
2007年
2期
223-230
,共8页
伊淑莹%孙爱清%赵春梅%刘箭
伊淑瑩%孫愛清%趙春梅%劉箭
이숙형%손애청%조춘매%류전
番茄%线粒体小分子热激蛋白%启动子%逆境%克隆
番茄%線粒體小分子熱激蛋白%啟動子%逆境%剋隆
번가%선립체소분자열격단백%계동자%역경%극륭
根据Southern杂交结果,选取KpnⅠ与EcoRⅠ双酶切番茄中蔬4号基因组DNA,3 kb左右的酶切片段连入pBSⅡKS(+)载体,构建成含有线粒体小分子热激蛋白基因(LeMTshsp)上游2 kb左右调控区的质粒文库.通过巢式PCR方法从构建的质粒文库中克隆出LeMTshsp基因上游1915 bp的调控区(GenBank登录号为AB239774).该序列含有TATA box及CAAT box等启动子基本元件,还具有6组典型的HSE元件及多个AT-rich区,另外还有许多逆境反应元件如ABRE,C-repeat-DRE,AP-1.凝胶阻滞结果表明, 纯化的HsfA2蛋白与LeMTshsp启动子的HSE元件在体外具有结合活性,且与近端5组HSE的结合活性比与远端HSE的结合活性强.构建该启动子与GUS基因的融合载体,利用农杆菌介导的叶圆盘法转化番茄,GUS组织化学染色结果表明LeMTshsp启动子对热激、低温、外源ABA及重金属胁迫都有应答.
根據Southern雜交結果,選取KpnⅠ與EcoRⅠ雙酶切番茄中蔬4號基因組DNA,3 kb左右的酶切片段連入pBSⅡKS(+)載體,構建成含有線粒體小分子熱激蛋白基因(LeMTshsp)上遊2 kb左右調控區的質粒文庫.通過巢式PCR方法從構建的質粒文庫中剋隆齣LeMTshsp基因上遊1915 bp的調控區(GenBank登錄號為AB239774).該序列含有TATA box及CAAT box等啟動子基本元件,還具有6組典型的HSE元件及多箇AT-rich區,另外還有許多逆境反應元件如ABRE,C-repeat-DRE,AP-1.凝膠阻滯結果錶明, 純化的HsfA2蛋白與LeMTshsp啟動子的HSE元件在體外具有結閤活性,且與近耑5組HSE的結閤活性比與遠耑HSE的結閤活性彊.構建該啟動子與GUS基因的融閤載體,利用農桿菌介導的葉圓盤法轉化番茄,GUS組織化學染色結果錶明LeMTshsp啟動子對熱激、低溫、外源ABA及重金屬脅迫都有應答.
근거Southern잡교결과,선취KpnⅠ여EcoRⅠ쌍매절번가중소4호기인조DNA,3 kb좌우적매절편단련입pBSⅡKS(+)재체,구건성함유선립체소분자열격단백기인(LeMTshsp)상유2 kb좌우조공구적질립문고.통과소식PCR방법종구건적질립문고중극륭출LeMTshsp기인상유1915 bp적조공구(GenBank등록호위AB239774).해서렬함유TATA box급CAAT box등계동자기본원건,환구유6조전형적HSE원건급다개AT-rich구,령외환유허다역경반응원건여ABRE,C-repeat-DRE,AP-1.응효조체결과표명, 순화적HsfA2단백여LeMTshsp계동자적HSE원건재체외구유결합활성,차여근단5조HSE적결합활성비여원단HSE적결합활성강.구건해계동자여GUS기인적융합재체,이용농간균개도적협원반법전화번가,GUS조직화학염색결과표명LeMTshsp계동자대열격、저온、외원ABA급중금속협박도유응답.
