实验室研究与探索
實驗室研究與探索
실험실연구여탐색
LAABORATORY REESEARCH AND EXPLORATION
2010年
7期
14-18
,共5页
赵丹%张冬东%隋心%冯富娟
趙丹%張鼕東%隋心%馮富娟
조단%장동동%수심%풍부연
红松%正交设计%反应体系%SRAP-PCR%单因子试验
紅鬆%正交設計%反應體繫%SRAP-PCR%單因子試驗
홍송%정교설계%반응체계%SRAP-PCR%단인자시험
相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)是对ORFs(Open Reading Frames)进行扩增的一种新型的基于PCR的标记方法.以CTAB法提取的红松针叶DNA为模板,应用单因子试验及L16 (45)正交试验系统分析了DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶浓度等对SRAP-PCR扩增结果的影响.确定了PCR的最佳反应体系为:20 μL体系中,1×PCR buffer 2 μL、DNA模板40～100 ng,Mg2+ 2.5mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.15 μmol/L ,Taq酶1.5 U.PCR最优的扩增程序为:进行35个循环,前5个循环中 94 ℃变性1 min,35 ℃复性1 min ,延伸30 s;后30个循环中94 ℃变性1 min,50 ℃复性1 min,72 ℃延伸1 min;最后72 ℃延伸7 min,4 ℃保存.在此反应体系下,所扩增谱带清晰、稳定、多态性高,为进行红松不同种源间遗传分化以及构建遗传图谱等内容的研究奠定基础.
相關序列擴增多態性(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)是對ORFs(Open Reading Frames)進行擴增的一種新型的基于PCR的標記方法.以CTAB法提取的紅鬆針葉DNA為模闆,應用單因子試驗及L16 (45)正交試驗繫統分析瞭DNA模闆濃度、Mg2+濃度、dNTPs濃度、引物濃度、Taq酶濃度等對SRAP-PCR擴增結果的影響.確定瞭PCR的最佳反應體繫為:20 μL體繫中,1×PCR buffer 2 μL、DNA模闆40～100 ng,Mg2+ 2.5mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.15 μmol/L ,Taq酶1.5 U.PCR最優的擴增程序為:進行35箇循環,前5箇循環中 94 ℃變性1 min,35 ℃複性1 min ,延伸30 s;後30箇循環中94 ℃變性1 min,50 ℃複性1 min,72 ℃延伸1 min;最後72 ℃延伸7 min,4 ℃保存.在此反應體繫下,所擴增譜帶清晰、穩定、多態性高,為進行紅鬆不同種源間遺傳分化以及構建遺傳圖譜等內容的研究奠定基礎.
상관서렬확증다태성(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)시대ORFs(Open Reading Frames)진행확증적일충신형적기우PCR적표기방법.이CTAB법제취적홍송침협DNA위모판,응용단인자시험급L16 (45)정교시험계통분석료DNA모판농도、Mg2+농도、dNTPs농도、인물농도、Taq매농도등대SRAP-PCR확증결과적영향.학정료PCR적최가반응체계위:20 μL체계중,1×PCR buffer 2 μL、DNA모판40～100 ng,Mg2+ 2.5mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,인물0.15 μmol/L ,Taq매1.5 U.PCR최우적확증정서위:진행35개순배,전5개순배중 94 ℃변성1 min,35 ℃복성1 min ,연신30 s;후30개순배중94 ℃변성1 min,50 ℃복성1 min,72 ℃연신1 min;최후72 ℃연신7 min,4 ℃보존.재차반응체계하,소확증보대청석、은정、다태성고,위진행홍송불동충원간유전분화이급구건유전도보등내용적연구전정기출.
