医药导报
醫藥導報
의약도보
HERALD OF MEDICINE
2011年
6期
709-712
,共4页
李佩珊%张春燕%李时君%陈妍%项美娟%李方和%张洪
李珮珊%張春燕%李時君%陳妍%項美娟%李方和%張洪
리패산%장춘연%리시군%진연%항미연%리방화%장홍
菌苗%多糖抗体%A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖%结合苗%单克隆抗体
菌苗%多糖抗體%A群奈瑟腦膜炎毬菌莢膜多糖%結閤苗%單剋隆抗體
균묘%다당항체%A군내슬뇌막염구균협막다당%결합묘%단극륭항체
目的 研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体(GAMP mAb).方法 以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素(GAMP-TT)耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株(2E7).采用秋水仙素阻断法测定其染色体数目,降植烷诱导法制备含该抗体的小鼠腹腔积液,辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)灰度扫描测定提取物纯度,改良过碘酸盐氧化法制备辣根过氧化物酶(HRP)标记抗GAMP mAb,并采用中和法及其抗原替代法对抗GAMP mAb的特异性进行初步的鉴定.结果 所获得的杂交瘤细胞(2E7)具有很好的生长特性,染色体数目约为139.73条;抗体分泌量适中,Ig亚类为IgG1,提取物浓度1.76～2.32 mg·mL-1,纯度97.2%,标记抗GAMP mAb的效价为1:25 600;抗原替代实验与中和实验对其特异性考核,初步结果证实2E7 mAb具有很好的抗GAMP特异性.结论 成功制备抗GAMP mAb,为GAMP-TT疫苗的生产监测及产品质量控制提供了必要的物质基础.
目的 研製抗A群奈瑟腦膜炎毬菌莢膜多糖單剋隆抗體(GAMP mAb).方法 以A群奈瑟腦膜炎毬菌莢膜多糖-破傷風類毒素(GAMP-TT)耦聯物免疫BALB/c小鼠,用常規細胞融閤與剋隆化技術穫得一株能穩定分泌抗GAMP mAb的雜交瘤細胞株(2E7).採用鞦水仙素阻斷法測定其染色體數目,降植烷誘導法製備含該抗體的小鼠腹腔積液,辛痠-硫痠銨沉澱法純化單剋隆抗體,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)灰度掃描測定提取物純度,改良過碘痠鹽氧化法製備辣根過氧化物酶(HRP)標記抗GAMP mAb,併採用中和法及其抗原替代法對抗GAMP mAb的特異性進行初步的鑒定.結果 所穫得的雜交瘤細胞(2E7)具有很好的生長特性,染色體數目約為139.73條;抗體分泌量適中,Ig亞類為IgG1,提取物濃度1.76～2.32 mg·mL-1,純度97.2%,標記抗GAMP mAb的效價為1:25 600;抗原替代實驗與中和實驗對其特異性攷覈,初步結果證實2E7 mAb具有很好的抗GAMP特異性.結論 成功製備抗GAMP mAb,為GAMP-TT疫苗的生產鑑測及產品質量控製提供瞭必要的物質基礎.
목적 연제항A군내슬뇌막염구균협막다당단극륭항체(GAMP mAb).방법 이A군내슬뇌막염구균협막다당-파상풍류독소(GAMP-TT)우련물면역BALB/c소서,용상규세포융합여극륭화기술획득일주능은정분비항GAMP mAb적잡교류세포주(2E7).채용추수선소조단법측정기염색체수목,강식완유도법제비함해항체적소서복강적액,신산-류산안침정법순화단극륭항체,십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)회도소묘측정제취물순도,개량과전산염양화법제비랄근과양화물매(HRP)표기항GAMP mAb,병채용중화법급기항원체대법대항GAMP mAb적특이성진행초보적감정.결과 소획득적잡교류세포(2E7)구유흔호적생장특성,염색체수목약위139.73조;항체분비량괄중,Ig아류위IgG1,제취물농도1.76～2.32 mg·mL-1,순도97.2%,표기항GAMP mAb적효개위1:25 600;항원체대실험여중화실험대기특이성고핵,초보결과증실2E7 mAb구유흔호적항GAMP특이성.결론 성공제비항GAMP mAb,위GAMP-TT역묘적생산감측급산품질량공제제공료필요적물질기출.
