中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
8期
731-733,737
,共4页
王宇%戴佳琳%黄江%廖兴江
王宇%戴佳琳%黃江%廖興江
왕우%대가림%황강%료흥강
亚洲带绦虫%60S核糖体蛋白L8基因%基因克隆%原核表达
亞洲帶縚蟲%60S覈糖體蛋白L8基因%基因剋隆%原覈錶達
아주대조충%60S핵당체단백L8기인%기인극륭%원핵표체
目的:原核克隆表达亚洲带绦虫成虫60S核糖体蛋白L8基因（Ta RPL8）,探索其应用前景.方法:用RT-PCR方法从亚洲带绦虫成虫cDNA中获取RPL8基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析.结果:PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ta RPL8重组质粒构建成功.SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,亲和层析获得了高纯度蛋白.重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别但不能够被正常大鼠血清识别,表明其具有免疫原性.结论:亚洲带绦虫成虫Ta RPL8基因可在大肠埃希菌BL21/DE3中获得具有免疫原性的表达,为进一步的功能研究奠定了基础.
目的:原覈剋隆錶達亞洲帶縚蟲成蟲60S覈糖體蛋白L8基因（Ta RPL8）,探索其應用前景.方法:用RT-PCR方法從亞洲帶縚蟲成蟲cDNA中穫取RPL8基因,剋隆到原覈錶達質粒pET-28a(+)中,在大腸埃希菌BL21/DE3中用IPTG誘導錶達,錶達產物通過SDS-PAGE進行鑒定,用鎳離子金屬螯閤劑親和層析柱進行純化,純化的重組蛋白用蛋白印跡進行免疫學分析.結果:PCR、雙酶切及DNA測序結果均錶明pET-28a(+)-Ta RPL8重組質粒構建成功.SDS-PAGE結果錶明目的基因在大腸埃希菌BL21/DE3中穫得高效錶達,親和層析穫得瞭高純度蛋白.重組蛋白可被其免疫的SD大鼠血清識彆但不能夠被正常大鼠血清識彆,錶明其具有免疫原性.結論:亞洲帶縚蟲成蟲Ta RPL8基因可在大腸埃希菌BL21/DE3中穫得具有免疫原性的錶達,為進一步的功能研究奠定瞭基礎.
목적:원핵극륭표체아주대조충성충60S핵당체단백L8기인（Ta RPL8）,탐색기응용전경.방법:용RT-PCR방법종아주대조충성충cDNA중획취RPL8기인,극륭도원핵표체질립pET-28a(+)중,재대장애희균BL21/DE3중용IPTG유도표체,표체산물통과SDS-PAGE진행감정,용얼리자금속오합제친화층석주진행순화,순화적중조단백용단백인적진행면역학분석.결과:PCR、쌍매절급DNA측서결과균표명pET-28a(+)-Ta RPL8중조질립구건성공.SDS-PAGE결과표명목적기인재대장애희균BL21/DE3중획득고효표체,친화층석획득료고순도단백.중조단백가피기면역적SD대서혈청식별단불능구피정상대서혈청식별,표명기구유면역원성.결론:아주대조충성충Ta RPL8기인가재대장애희균BL21/DE3중획득구유면역원성적표체,위진일보적공능연구전정료기출.
