中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2007年
2期
182-184
,共3页
庄立伟%陆海英%于岩岩%斯崇文%于敏%张乃临%公维波
莊立偉%陸海英%于巖巖%斯崇文%于敏%張迺臨%公維波
장립위%륙해영%우암암%사숭문%우민%장내림%공유파
DNA%逆转录聚合酶链反应
DNA%逆轉錄聚閤酶鏈反應
DNA%역전록취합매련반응
目的 建立一种HBV cccDNA定量检测方法,并定量检测慢性乙型肝炎患者肝组织内的cccDNA.方法 分析A-G亚型HBV DNA序列,根据其结构特点,于DNA缺口两侧高度保守区域设计引物和探针,并摸索该方法最佳反应条件,以期实现不同亚型HBV cccDNA的特异性扩增.对该方法进行特异性、敏感性及重复性检测.将扩增产物进行测序以检测方法的特异性.用102～1010拷贝/ml的标准质粒检测方法的敏感度.106拷贝/ml标准质粒30复管,以检测其重复性.取32例慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后的肝穿组织,提取DNA,用该方法进行cccDNA定量,观察抗病毒治疗前后cccDNA的变化及与总HBV DNA的关系.结果 测序结果显示扩增产物为目的片段;该定量方法的敏感度为103～1010拷贝/ml;标准质粒30复管后其Ct值为29.69±0.31,变异系数为1.04%.肝内cccDNA占肝内总HBV DNA的47%～98%,平均81.5%.结论 本方法操作简便,特异性高,定量线形范围宽及重复性好,可用于科研中cccDNA的定量检测.
目的 建立一種HBV cccDNA定量檢測方法,併定量檢測慢性乙型肝炎患者肝組織內的cccDNA.方法 分析A-G亞型HBV DNA序列,根據其結構特點,于DNA缺口兩側高度保守區域設計引物和探針,併摸索該方法最佳反應條件,以期實現不同亞型HBV cccDNA的特異性擴增.對該方法進行特異性、敏感性及重複性檢測.將擴增產物進行測序以檢測方法的特異性.用102～1010拷貝/ml的標準質粒檢測方法的敏感度.106拷貝/ml標準質粒30複管,以檢測其重複性.取32例慢性乙型肝炎患者抗病毒治療前後的肝穿組織,提取DNA,用該方法進行cccDNA定量,觀察抗病毒治療前後cccDNA的變化及與總HBV DNA的關繫.結果 測序結果顯示擴增產物為目的片段;該定量方法的敏感度為103～1010拷貝/ml;標準質粒30複管後其Ct值為29.69±0.31,變異繫數為1.04%.肝內cccDNA佔肝內總HBV DNA的47%～98%,平均81.5%.結論 本方法操作簡便,特異性高,定量線形範圍寬及重複性好,可用于科研中cccDNA的定量檢測.
목적 건립일충HBV cccDNA정량검측방법,병정량검측만성을형간염환자간조직내적cccDNA.방법 분석A-G아형HBV DNA서렬,근거기결구특점,우DNA결구량측고도보수구역설계인물화탐침,병모색해방법최가반응조건,이기실현불동아형HBV cccDNA적특이성확증.대해방법진행특이성、민감성급중복성검측.장확증산물진행측서이검측방법적특이성.용102～1010고패/ml적표준질립검측방법적민감도.106고패/ml표준질립30복관,이검측기중복성.취32례만성을형간염환자항병독치료전후적간천조직,제취DNA,용해방법진행cccDNA정량,관찰항병독치료전후cccDNA적변화급여총HBV DNA적관계.결과 측서결과현시확증산물위목적편단;해정량방법적민감도위103～1010고패/ml;표준질립30복관후기Ct치위29.69±0.31,변이계수위1.04%.간내cccDNA점간내총HBV DNA적47%～98%,평균81.5%.결론 본방법조작간편,특이성고,정량선형범위관급중복성호,가용우과연중cccDNA적정량검측.
