生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
6期
758-762
,共5页
唐键%谢琪璇%潘善培%肖銮娟%董鲁%张春雪%孙彩军
唐鍵%謝琪璇%潘善培%肖鑾娟%董魯%張春雪%孫綵軍
당건%사기선%반선배%초란연%동로%장춘설%손채군
人卵透明带ZP3蛋白%P.pastoris%表达
人卵透明帶ZP3蛋白%P.pastoris%錶達
인란투명대ZP3단백%P.pastoris%표체
利用P.pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白.设计特定引物从全长hZP3 cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列;扩增片段插入表达载体pPIC9K中;线性化后的重组质粒转入P.pastoris中,用高浓度G418筛选高拷贝菌株,然后甲醇诱导目的蛋白表达.用SDS-PAGE和Western blot分析表达产物.结果发现P.pastoris表达的人ZP3蛋白可以分泌到培养液中,并且可溶性好.纯化前后的重组人ZP3蛋白均能与兔抗猪ZP3蛋白抗体发生交叉反应,证实表达的目的蛋白具有反应原性.
利用P.pastoris錶達人卵透明帶ZP3蛋白.設計特定引物從全長hZP3 cDNA上擴增含跨膜區序列的人卵透明帶ZP3基因片段,併在N末耑接上串聯組氨痠編碼序列的重組基因序列;擴增片段插入錶達載體pPIC9K中;線性化後的重組質粒轉入P.pastoris中,用高濃度G418篩選高拷貝菌株,然後甲醇誘導目的蛋白錶達.用SDS-PAGE和Western blot分析錶達產物.結果髮現P.pastoris錶達的人ZP3蛋白可以分泌到培養液中,併且可溶性好.純化前後的重組人ZP3蛋白均能與兔抗豬ZP3蛋白抗體髮生交扠反應,證實錶達的目的蛋白具有反應原性.
이용P.pastoris표체인란투명대ZP3단백.설계특정인물종전장hZP3 cDNA상확증함과막구서렬적인란투명대ZP3기인편단,병재N말단접상천련조안산편마서렬적중조기인서렬;확증편단삽입표체재체pPIC9K중;선성화후적중조질립전입P.pastoris중,용고농도G418사선고고패균주,연후갑순유도목적단백표체.용SDS-PAGE화Western blot분석표체산물.결과발현P.pastoris표체적인ZP3단백가이분비도배양액중,병차가용성호.순화전후적중조인ZP3단백균능여토항저ZP3단백항체발생교차반응,증실표체적목적단백구유반응원성.
