大鼠微管相关蛋白4重组腺病毒载体的构建及在细胞中的表达鉴定
대서미관상관단백4중조선병독재체적구건급재세포중적표체감정
Construction and identification of Rattus norvegicus microtubule-associated protein 4 gene recombinant adenovirus
  • 万方数据
    第三军医大学学报 제삼군의대학학보
    ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
    2006年 9期 880-882 ,共3页

    房亚东%徐雪%党永明%郑霁%张西联%张家平%陈渝%张琼%黄跃生

    방아동%서설%당영명%정제%장서련%장가평%진투%장경%황약생

    MAP4%腺病毒%cDNA%微管相关蛋白 MAP4%腺病毒%cDNA%微管相關蛋白
    MAP4%선병독%cDNA%미관상관단백
    目的构建大鼠微管相关蛋白4(microtubule-ossociated protein 4,MAP4)重组腺病毒载体,并转染新生大鼠体外培养的心肌细胞进行表达和鉴定,为真核表达及有关实验研究提供基础.方法设计1对引物,应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,从大鼠心肌细胞总mRNA中扩增出MAP4 cDNA,并将MAP4 cDNA克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle2中,构建pShuttle2-MAP4表达质粒.将此表达质粒扩增纯化酶切获得含有目的片段MAP4 cDNA的表达盒与Adeno-X Virul DNA重组并线性化后转染HEK293T细胞,包装产生大鼠MAP4重组腺病毒.并且转染新生大鼠原代心肌细胞,应用免疫组化的方法进行表达鉴定.结果扩增所得的MAP4 cDNA片段经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序最终确定为大鼠MAP4基因,所得大鼠MAP4重组腺病毒滴度为2.3×108pfu/ml.转染原代心肌细胞48 h后MAP4表达显著增强.结论为研究MAP4的生物学活性及功能的基因治疗提供了基础.
    목적구건대서미관상관단백4(microtubule-ossociated protein 4,MAP4)중조선병독재체,병전염신생대서체외배양적심기세포진행표체화감정,위진핵표체급유관실험연구제공기출.방법설계1대인물,응용역전록다취매련식반응(RT-PCR)기술,종대서심기세포총mRNA중확증출MAP4 cDNA,병장MAP4 cDNA극륭도선병독천사질립pShuttle2중,구건pShuttle2-MAP4표체질립.장차표체질립확증순화매절획득함유목적편단MAP4 cDNA적표체합여Adeno-X Virul DNA중조병선성화후전염HEK293T세포,포장산생대서MAP4중조선병독.병차전염신생대서원대심기세포,응용면역조화적방법진행표체감정.결과확증소득적MAP4 cDNA편단경매절감정、PCR확증、DNA측서최종학정위대서MAP4기인,소득대서MAP4중조선병독적도위2.3×108pfu/ml.전염원대심기세포48 h후MAP4표체현저증강.결론위연구MAP4적생물학활성급공능적기인치료제공료기출.
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