现代生物医学进展
現代生物醫學進展
현대생물의학진전
PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE
2006年
9期
12-14,20
,共4页
张爱英%沈棋%龚一蕾%侯琳%张波
張愛英%瀋棋%龔一蕾%侯琳%張波
장애영%침기%공일뢰%후림%장파
人乳头瘤病毒%抗体%免疫组化%原位杂交
人乳頭瘤病毒%抗體%免疫組化%原位雜交
인유두류병독%항체%면역조화%원위잡교
目的:研制人乳头瘤病毒(HPV)E1蛋白抗体,并运用于组织病理学免疫组织化学检测.方法:通过基因重组、原核表达并纯化HPV E1蛋白片段;经免疫兔制备多克隆抗体,并经免疫印迹及基因转染鉴定特异性;免疫组织化学法检测13例宫颈病变中E1蛋白,经原位杂交验证.结果:将PCR扩增的E1蛋白保守功能域(第362～456aa)基因片断重组于原核表达载体pEK-318的6×His标签下游,经诱导表达和亲合层析,纯化出14kD His-E1蛋白.制备的多克隆血清经免疫印迹法检测显示不仅可与His-E1蛋白结合,也与HeLa细胞内源性及基因转染表达的天然E1蛋白反应.运用免疫血清检测7例宫颈尖锐湿疣和6例宫颈上皮内瘤病(CIN)III级病例显示:7例宫颈尖锐湿疣6例为阳性染色,阳性反应主要分布于病灶中挖空细胞的胞核.同时6例CINIII级病变全部阳性,着色主要为非典型增生鳞状上皮细胞核.为了确定上述病例中E1蛋白免疫组化检测的准确性,运用原位杂交法进行了验证.结果显示:7例宫颈尖锐湿疣均为HPV6/11型杂交阳性,6例CINIII级病变全部为HPV16型杂交阳性,显色部位与免疫组化基本一致.结论:本研究结果显示研制的HPV E1蛋白抗体可以用于病理组织学HPV病毒检测.
目的:研製人乳頭瘤病毒(HPV)E1蛋白抗體,併運用于組織病理學免疫組織化學檢測.方法:通過基因重組、原覈錶達併純化HPV E1蛋白片段;經免疫兔製備多剋隆抗體,併經免疫印跡及基因轉染鑒定特異性;免疫組織化學法檢測13例宮頸病變中E1蛋白,經原位雜交驗證.結果:將PCR擴增的E1蛋白保守功能域(第362～456aa)基因片斷重組于原覈錶達載體pEK-318的6×His標籤下遊,經誘導錶達和親閤層析,純化齣14kD His-E1蛋白.製備的多剋隆血清經免疫印跡法檢測顯示不僅可與His-E1蛋白結閤,也與HeLa細胞內源性及基因轉染錶達的天然E1蛋白反應.運用免疫血清檢測7例宮頸尖銳濕疣和6例宮頸上皮內瘤病(CIN)III級病例顯示:7例宮頸尖銳濕疣6例為暘性染色,暘性反應主要分佈于病竈中挖空細胞的胞覈.同時6例CINIII級病變全部暘性,著色主要為非典型增生鱗狀上皮細胞覈.為瞭確定上述病例中E1蛋白免疫組化檢測的準確性,運用原位雜交法進行瞭驗證.結果顯示:7例宮頸尖銳濕疣均為HPV6/11型雜交暘性,6例CINIII級病變全部為HPV16型雜交暘性,顯色部位與免疫組化基本一緻.結論:本研究結果顯示研製的HPV E1蛋白抗體可以用于病理組織學HPV病毒檢測.
목적:연제인유두류병독(HPV)E1단백항체,병운용우조직병이학면역조직화학검측.방법:통과기인중조、원핵표체병순화HPV E1단백편단;경면역토제비다극륭항체,병경면역인적급기인전염감정특이성;면역조직화학법검측13례궁경병변중E1단백,경원위잡교험증.결과:장PCR확증적E1단백보수공능역(제362～456aa)기인편단중조우원핵표체재체pEK-318적6×His표첨하유,경유도표체화친합층석,순화출14kD His-E1단백.제비적다극륭혈청경면역인적법검측현시불부가여His-E1단백결합,야여HeLa세포내원성급기인전염표체적천연E1단백반응.운용면역혈청검측7례궁경첨예습우화6례궁경상피내류병(CIN)III급병례현시:7례궁경첨예습우6례위양성염색,양성반응주요분포우병조중알공세포적포핵.동시6례CINIII급병변전부양성,착색주요위비전형증생린상상피세포핵.위료학정상술병례중E1단백면역조화검측적준학성,운용원위잡교법진행료험증.결과현시:7례궁경첨예습우균위HPV6/11형잡교양성,6례CINIII급병변전부위HPV16형잡교양성,현색부위여면역조화기본일치.결론:본연구결과현시연제적HPV E1단백항체가이용우병리조직학HPV병독검측.
