微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
3期
287-292
,共6页
韩秀娥%全滟平%高旭%相文华%周建华
韓秀娥%全滟平%高旭%相文華%週建華
한수아%전염평%고욱%상문화%주건화
马传染性贫血病毒%N-连接糖基化%定点突变%感染性克隆
馬傳染性貧血病毒%N-連接糖基化%定點突變%感染性剋隆
마전염성빈혈병독%N-련접당기화%정점돌변%감염성극륭
根据马传贫强毒株EIAV-L和疫苗株EIAV-FDD表面蛋白gp90的N-连接糖基化的变化规律,采用PCR定点突变的方法,对全长感染性克隆pLGFD3-8上的N-连接糖基化的差异区域进行改造后,构建成含有3个N-连接糖基化位点突变的感染性克隆pLGNl91N236N246.将其转染驴胎皮肤细胞(FDD),通过用逆转录酶活性、间接免疫荧光和RT-PCR方法检测而确定其感染性.结果表明,在FDD细胞中盲传三代后,在细胞培养物中可检测到逆转录酶活性,RT-PCR和间接免疫荧光检测均呈阳性,电镜下见到典型的EIAV颗粒.这一结果可能对N-连接糖基化在我国马传贫弱毒疫苗致弱机理的作用研究而奠定良好的基础.
根據馬傳貧彊毒株EIAV-L和疫苗株EIAV-FDD錶麵蛋白gp90的N-連接糖基化的變化規律,採用PCR定點突變的方法,對全長感染性剋隆pLGFD3-8上的N-連接糖基化的差異區域進行改造後,構建成含有3箇N-連接糖基化位點突變的感染性剋隆pLGNl91N236N246.將其轉染驢胎皮膚細胞(FDD),通過用逆轉錄酶活性、間接免疫熒光和RT-PCR方法檢測而確定其感染性.結果錶明,在FDD細胞中盲傳三代後,在細胞培養物中可檢測到逆轉錄酶活性,RT-PCR和間接免疫熒光檢測均呈暘性,電鏡下見到典型的EIAV顆粒.這一結果可能對N-連接糖基化在我國馬傳貧弱毒疫苗緻弱機理的作用研究而奠定良好的基礎.
근거마전빈강독주EIAV-L화역묘주EIAV-FDD표면단백gp90적N-련접당기화적변화규률,채용PCR정점돌변적방법,대전장감염성극륭pLGFD3-8상적N-련접당기화적차이구역진행개조후,구건성함유3개N-련접당기화위점돌변적감염성극륭pLGNl91N236N246.장기전염려태피부세포(FDD),통과용역전록매활성、간접면역형광화RT-PCR방법검측이학정기감염성.결과표명,재FDD세포중맹전삼대후,재세포배양물중가검측도역전록매활성,RT-PCR화간접면역형광검측균정양성,전경하견도전형적EIAV과립.저일결과가능대N-련접당기화재아국마전빈약독역묘치약궤리적작용연구이전정량호적기출.
