CAJ | 학술논문

重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用
중조항HER2융합단백기인ScFv/tBid대골육류E10세포적촉조망작용
Pro-apoptotic effect of recombinant anti-HER2 fusion protein ScFv/tBid gene on osteosarcoma E10 cells

万方数据

中国肿瘤生物治疗杂志中國腫瘤生物治療雜誌 중국종류생물치료잡지
CHINESE JOURNAL OF CANCER BIOTHERAPY
2008年 2期 105-109 ,共5页

裘秀春%单乐群%纪振钢%杨彤涛%龙华%许彦鸣%周勇%马保安%杨安钢%范清宇

구수춘%단악군%기진강%양동도%룡화%허언명%주용%마보안%양안강%범청우

tBid%人表皮生长因子受体2%融合蛋白%骨肉瘤细胞%细胞凋亡 tBid%人錶皮生長因子受體2%融閤蛋白%骨肉瘤細胞%細胞凋亡
tBid%인표피생장인자수체2%융합단백%골육류세포%세포조망

目的:构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促调亡作用.方法:通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪(FCM)检测E10细胞膜表面HER2的表达.将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和tBid基因连接,构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv/tBid载体,转染骨肉瘤E10细胞.间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,Annexin V染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况.结果:流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达.成功构建重组融合蛋白基因质粒 pCMV-ScFv/tBid.重组质粒转染E10细胞后,间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达;细胞色素C在细胞质中出现;细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征.Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高(16.1%vs 4.5%);TUNEL染色显示,E10细胞出现典型的凋亡特征.结论:重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达,并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡.
목적:구건항HER2중조융합단백기인ScFv/tBid,병탐토기대골육류E10세포적촉조망작용.방법:통과간접면역형광염색、류식세포의(FCM)검측E10세포막표면HER2적표체.장항HER2단련항체기인e23sFv여동록가단포균외독소PE적전막결구역기인(PEⅡ)화tBid기인련접,구건항HER2중조융합단백기인ScFv/tBid,장기극륭입진핵표체재체pCMV중구건중조pCMV-ScFv/tBid재체,전염골육류E10세포.간접면역형광법검측목적단백표체화세포형태학변화,Annexin V염색류식세포술급TUNEL법검측E10세포적조망정황.결과:류식세포의검측도E10세포막표면유HER2적표체.성공구건중조융합단백기인질립 pCMV-ScFv/tBid.중조질립전염E10세포후,간접면역형광쌍표기염색검측도E10세포중tBid적과표체;세포색소C재세포질중출현;세포출현명현적고축、핵농축등형태특정.Annexin V염색후류식세포의검측가견실험조세포조망솔교대조조명현승고(16.1%vs 4.5%);TUNEL염색현시,E10세포출현전형적조망특정.결론:중조항HER2융합단백기인ScFv/tBid가이재전염적골육류E10세포중표체,병유도골육류세포발생조망.