生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
6期
796-800
,共5页
吕月蒙%吴晓洁%周艳荣%熊福银%林艳丽%陈红星
呂月矇%吳曉潔%週豔榮%熊福銀%林豔麗%陳紅星
려월몽%오효길%주염영%웅복은%림염려%진홍성
杂合基因座%细菌人工染色体%牛αS1酪蛋白%组织型纤溶酶原激活剂
雜閤基因座%細菌人工染色體%牛αS1酪蛋白%組織型纖溶酶原激活劑
잡합기인좌%세균인공염색체%우αS1락단백%조직형섬용매원격활제
目的:构建一个利用牛αS1酪蛋白基因座完整的上下游调控序列指导人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)基因组序列在乳腺特异性高效表达的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座.方法:采用连续3步基因抓捕的方法.首先,以pBR322载体作为骨架,插入预先无痕连接在一起的6个同源臂,构成能连续进行3次基因抓捕的抓捕载体；然后,在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术,第一步从含牛αS1酪蛋白基因座的细菌人工染色体(BAC)上亚克隆9 kb的牛αS1酪蛋白基因3 ′端侧翼序列到抓捕载体上,第二步从人tPA BAC上亚克隆17 kb的从起始密码子(ATG)到终止密码子(TGA)的人tPA基因组序列,第三步从牛αS1酪蛋白BAC上亚克隆20 kb的牛αS1酪蛋白基因5 ′端完整侧翼序列,并使这3个基因片段在抓捕载体上自动无痕地连接在一起,形成一个长约46kb的牛αS1酪蛋白-人tPA杂合基因座.结果:经过PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,构建的杂合基因座中,原牛αS1酪蛋白基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被人tPA基因组序列精确置换.结论:连续三步基因抓捕构建杂合基因座乳腺表达载体的技术,为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了探索性研究.
目的:構建一箇利用牛αS1酪蛋白基因座完整的上下遊調控序列指導人組織型纖溶酶原激活劑(tPA)基因組序列在乳腺特異性高效錶達的牛αS1酪蛋白-人tPA雜閤基因座.方法:採用連續3步基因抓捕的方法.首先,以pBR322載體作為骨架,插入預先無痕連接在一起的6箇同源臂,構成能連續進行3次基因抓捕的抓捕載體；然後,在大腸桿菌內利用Red同源重組繫統介導的缺口脩複技術,第一步從含牛αS1酪蛋白基因座的細菌人工染色體(BAC)上亞剋隆9 kb的牛αS1酪蛋白基因3 ′耑側翼序列到抓捕載體上,第二步從人tPA BAC上亞剋隆17 kb的從起始密碼子(ATG)到終止密碼子(TGA)的人tPA基因組序列,第三步從牛αS1酪蛋白BAC上亞剋隆20 kb的牛αS1酪蛋白基因5 ′耑完整側翼序列,併使這3箇基因片段在抓捕載體上自動無痕地連接在一起,形成一箇長約46kb的牛αS1酪蛋白-人tPA雜閤基因座.結果:經過PCR擴增、限製性內切酶消化和序列測定驗證,構建的雜閤基因座中,原牛αS1酪蛋白基因組編碼序列從起始密碼子到終止密碼子被人tPA基因組序列精確置換.結論:連續三步基因抓捕構建雜閤基因座乳腺錶達載體的技術,為乳腺生物反應器高效錶達大載體的製備提供瞭探索性研究.
목적:구건일개이용우αS1락단백기인좌완정적상하유조공서렬지도인조직형섬용매원격활제(tPA)기인조서렬재유선특이성고효표체적우αS1락단백-인tPA잡합기인좌.방법:채용련속3보기인조포적방법.수선,이pBR322재체작위골가,삽입예선무흔련접재일기적6개동원비,구성능련속진행3차기인조포적조포재체；연후,재대장간균내이용Red동원중조계통개도적결구수복기술,제일보종함우αS1락단백기인좌적세균인공염색체(BAC)상아극륭9 kb적우αS1락단백기인3 ′단측익서렬도조포재체상,제이보종인tPA BAC상아극륭17 kb적종기시밀마자(ATG)도종지밀마자(TGA)적인tPA기인조서렬,제삼보종우αS1락단백BAC상아극륭20 kb적우αS1락단백기인5 ′단완정측익서렬,병사저3개기인편단재조포재체상자동무흔지련접재일기,형성일개장약46kb적우αS1락단백-인tPA잡합기인좌.결과:경과PCR확증、한제성내절매소화화서렬측정험증,구건적잡합기인좌중,원우αS1락단백기인조편마서렬종기시밀마자도종지밀마자피인tPA기인조서렬정학치환.결론:련속삼보기인조포구건잡합기인좌유선표체재체적기술,위유선생물반응기고효표체대재체적제비제공료탐색성연구.
