解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2012年
2期
253-257
,共5页
张建色%王辉%邵培刚%林贤丰%彭蒙蒙%薛向阳%梅劲
張建色%王輝%邵培剛%林賢豐%彭矇矇%薛嚮暘%梅勁
장건색%왕휘%소배강%림현봉%팽몽몽%설향양%매경
去细胞%肾%细胞外基质%血管铸型%组织工程%免疫荧光%大鼠
去細胞%腎%細胞外基質%血管鑄型%組織工程%免疫熒光%大鼠
거세포%신%세포외기질%혈관주형%조직공정%면역형광%대서
目的 通过灌注加浸泡法制备全肾细胞外基质支架,并对该生物支架进行鉴定. 方法 健康成年SD大鼠20只,取肾,行肾动脉留置针插管,灌注压3.6mmHg,恒温37℃依次浸泡灌注肝素化PBS溶液、0.05％胰蛋白酶溶液、1％十二烷基硫酸钠(SDS)溶液、1％Trition X-100溶液以及含青、链霉素的PBS溶液.处理后,行DNA定量与定性分析,透射电镜、HE染色及免疫荧光观察残留细胞核成分,进一步丙烯腈-丁二烯-苯乙烯树脂(ABS)铸型观察肾内血管分布情况. 结果 去细胞组DNA含量较对照组下降了97％,琼脂糖凝胶电泳未见明显DNA条带；透射电镜、HE染色及免疫荧光观察去细胞组保留了大量细胞外基质,未见明显细胞核成分残留；铸型标本显示去细胞组血管较稀疏,分支完整、清晰. 结论 联合酶消化法与去垢剂洗涤法,经灌注加浸泡法处理的全肾,可有效清除肾内所有细胞成分,较好地保留细胞外基质支架和血管网络结构,是一种简单易行且较为理想的制备组织工程肾生物支架的方法.
目的 通過灌註加浸泡法製備全腎細胞外基質支架,併對該生物支架進行鑒定. 方法 健康成年SD大鼠20隻,取腎,行腎動脈留置針插管,灌註壓3.6mmHg,恆溫37℃依次浸泡灌註肝素化PBS溶液、0.05％胰蛋白酶溶液、1％十二烷基硫痠鈉(SDS)溶液、1％Trition X-100溶液以及含青、鏈黴素的PBS溶液.處理後,行DNA定量與定性分析,透射電鏡、HE染色及免疫熒光觀察殘留細胞覈成分,進一步丙烯腈-丁二烯-苯乙烯樹脂(ABS)鑄型觀察腎內血管分佈情況. 結果 去細胞組DNA含量較對照組下降瞭97％,瓊脂糖凝膠電泳未見明顯DNA條帶；透射電鏡、HE染色及免疫熒光觀察去細胞組保留瞭大量細胞外基質,未見明顯細胞覈成分殘留；鑄型標本顯示去細胞組血管較稀疏,分支完整、清晰. 結論 聯閤酶消化法與去垢劑洗滌法,經灌註加浸泡法處理的全腎,可有效清除腎內所有細胞成分,較好地保留細胞外基質支架和血管網絡結構,是一種簡單易行且較為理想的製備組織工程腎生物支架的方法.
목적 통과관주가침포법제비전신세포외기질지가,병대해생물지가진행감정. 방법 건강성년SD대서20지,취신,행신동맥류치침삽관,관주압3.6mmHg,항온37℃의차침포관주간소화PBS용액、0.05％이단백매용액、1％십이완기류산납(SDS)용액、1％Trition X-100용액이급함청、련매소적PBS용액.처리후,행DNA정량여정성분석,투사전경、HE염색급면역형광관찰잔류세포핵성분,진일보병희정-정이희-분을희수지(ABS)주형관찰신내혈관분포정황. 결과 거세포조DNA함량교대조조하강료97％,경지당응효전영미견명현DNA조대；투사전경、HE염색급면역형광관찰거세포조보류료대량세포외기질,미견명현세포핵성분잔류；주형표본현시거세포조혈관교희소,분지완정、청석. 결론 연합매소화법여거구제세조법,경관주가침포법처리적전신,가유효청제신내소유세포성분,교호지보류세포외기질지가화혈관망락결구,시일충간단역행차교위이상적제비조직공정신생물지가적방법.
