中国脊柱脊髓杂志
中國脊柱脊髓雜誌
중국척주척수잡지
CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD
2012年
9期
843-849
,共7页
吴剑宏%阮狄克%王德利%张超%何勍%王超锋%张燕%辛洪奎%顾韬%徐成%刘玥
吳劍宏%阮狄剋%王德利%張超%何勍%王超鋒%張燕%辛洪奎%顧韜%徐成%劉玥
오검굉%원적극%왕덕리%장초%하경%왕초봉%장연%신홍규%고도%서성%류모
髓核细胞%腺相关病毒%人端粒酶逆转录酶基因%基因治疗
髓覈細胞%腺相關病毒%人耑粒酶逆轉錄酶基因%基因治療
수핵세포%선상관병독%인단립매역전록매기인%기인치료
目的:研究重组腺相关病毒介导人端粒酶逆转录酶基因(recombinant adenoassociated virus vector-mediated human telomerase reverse transcriptase,rAAV-hTERT)转染对体外培养人髓核细胞功能的影响.方法:利用机械与酶消化的方法获得均一性的人椎间盘髓核细胞,将构建好的rAAV-hTERT转染P2代体外单层培养的髓核细胞.用重组腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinant adenoassociated virus vector-mediated enhanced green fluorescent protein,rAAV-EGFP)作为标记基因观察细胞转染效率,按感染复数(multiplicity of infection,MOI) 103、104、105病毒基因组拷贝数/细胞(vector genomes/cell,v.g/cell)设组,流式细胞仪检测,筛选病毒转染的最佳MOI;设立rAAV-hTERT转染组、AAV空病毒转染组及空白细胞对照组,用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reareaction,RT-PCR)及免疫印迹(Western-blot)方法检测rAAVhTERT转染后hTERT基因在髓核细胞内的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)及酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent,ELISA)检测髓核细胞合成Ⅱ型胶原及蛋白多糖能力的变化.结果:rAAV-EGFP转染细胞后第7天时,MOI为105 v.g/cell组转染效率可达73.9％,明显高于MOI 103、104 v.g/cell组(P＜0.05)；rAAV-hTERT转染组在转染后的第7、60、90、120天均可检测到hTERT基因的表达,而其他两组则无表达；转染rAAV-hTERT后120d之前,rAAV-hTERT转染组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原较其他两组均明显增高(P＜0.05),而两对照组之间则始终无明显差异(P＞0.05).结论:rAAV-hTERT能成功转染人椎间盘髓核细胞并正确表达,rAAV-hTERT转染能有效延长髓核细胞分泌Ⅱ型胶原及蛋白多糖功能.
目的:研究重組腺相關病毒介導人耑粒酶逆轉錄酶基因(recombinant adenoassociated virus vector-mediated human telomerase reverse transcriptase,rAAV-hTERT)轉染對體外培養人髓覈細胞功能的影響.方法:利用機械與酶消化的方法穫得均一性的人椎間盤髓覈細胞,將構建好的rAAV-hTERT轉染P2代體外單層培養的髓覈細胞.用重組腺相關病毒-增彊型綠色熒光蛋白(recombinant adenoassociated virus vector-mediated enhanced green fluorescent protein,rAAV-EGFP)作為標記基因觀察細胞轉染效率,按感染複數(multiplicity of infection,MOI) 103、104、105病毒基因組拷貝數/細胞(vector genomes/cell,v.g/cell)設組,流式細胞儀檢測,篩選病毒轉染的最佳MOI;設立rAAV-hTERT轉染組、AAV空病毒轉染組及空白細胞對照組,用反轉錄聚閤酶鏈反應(reverse transcription polymerase chain reareaction,RT-PCR)及免疫印跡(Western-blot)方法檢測rAAVhTERT轉染後hTERT基因在髓覈細胞內的錶達,實時定量聚閤酶鏈反應(real-time quantitative PCR)及酶聯免疫法(enzyme linked immunosorbent,ELISA)檢測髓覈細胞閤成Ⅱ型膠原及蛋白多糖能力的變化.結果:rAAV-EGFP轉染細胞後第7天時,MOI為105 v.g/cell組轉染效率可達73.9％,明顯高于MOI 103、104 v.g/cell組(P＜0.05)；rAAV-hTERT轉染組在轉染後的第7、60、90、120天均可檢測到hTERT基因的錶達,而其他兩組則無錶達；轉染rAAV-hTERT後120d之前,rAAV-hTERT轉染組分泌蛋白多糖及Ⅱ型膠原較其他兩組均明顯增高(P＜0.05),而兩對照組之間則始終無明顯差異(P＞0.05).結論:rAAV-hTERT能成功轉染人椎間盤髓覈細胞併正確錶達,rAAV-hTERT轉染能有效延長髓覈細胞分泌Ⅱ型膠原及蛋白多糖功能.
목적:연구중조선상관병독개도인단립매역전록매기인(recombinant adenoassociated virus vector-mediated human telomerase reverse transcriptase,rAAV-hTERT)전염대체외배양인수핵세포공능적영향.방법:이용궤계여매소화적방법획득균일성적인추간반수핵세포,장구건호적rAAV-hTERT전염P2대체외단층배양적수핵세포.용중조선상관병독-증강형록색형광단백(recombinant adenoassociated virus vector-mediated enhanced green fluorescent protein,rAAV-EGFP)작위표기기인관찰세포전염효솔,안감염복수(multiplicity of infection,MOI) 103、104、105병독기인조고패수/세포(vector genomes/cell,v.g/cell)설조,류식세포의검측,사선병독전염적최가MOI;설립rAAV-hTERT전염조、AAV공병독전염조급공백세포대조조,용반전록취합매련반응(reverse transcription polymerase chain reareaction,RT-PCR)급면역인적(Western-blot)방법검측rAAVhTERT전염후hTERT기인재수핵세포내적표체,실시정량취합매련반응(real-time quantitative PCR)급매련면역법(enzyme linked immunosorbent,ELISA)검측수핵세포합성Ⅱ형효원급단백다당능력적변화.결과:rAAV-EGFP전염세포후제7천시,MOI위105 v.g/cell조전염효솔가체73.9％,명현고우MOI 103、104 v.g/cell조(P＜0.05)；rAAV-hTERT전염조재전염후적제7、60、90、120천균가검측도hTERT기인적표체,이기타량조칙무표체；전염rAAV-hTERT후120d지전,rAAV-hTERT전염조분비단백다당급Ⅱ형효원교기타량조균명현증고(P＜0.05),이량대조조지간칙시종무명현차이(P＞0.05).결론:rAAV-hTERT능성공전염인추간반수핵세포병정학표체,rAAV-hTERT전염능유효연장수핵세포분비Ⅱ형효원급단백다당공능.
