中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2007年
10期
928-933
,共6页
马晶%张晓光%张晓梅%郭秀婵%曾毅
馬晶%張曉光%張曉梅%郭秀嬋%曾毅
마정%장효광%장효매%곽수선%증의
HIV-1%整合酶%原核表达%复性
HIV-1%整閤酶%原覈錶達%複性
HIV-1%정합매%원핵표체%복성
目的 对HIV-1整合酶蛋白进行原核表达、纯化以及复性研究.方法 从HIV-1 HXB2中PCR扩增出全长的整合酶基因,连入原核表达载体pET-30a中,得到pET-30a整合酶表达质粒.再将质粒转人大肠杆菌BL21中诱导表达,经镍柱纯化后得到整合酶蛋白.纯化后蛋白在FoldIt复性液中进行稀释复性确定最佳复性液,然后蛋白在此条件下复性并用反相柱回收,最后通过对复性蛋白抽干及再溶分析复性蛋白的物理稳定性.结果 HIV-1整合酶蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总量的10%.经镍柱纯化后蛋白的总浓度为0.9 mg/ml.蛋白的最佳复性液是:Tris-Cl 55 mmol/L,NaCl 264 mmol/L,KCl 11 mmol/L,Gu-HCl 550 mmol/L,EDTA 1.1 mmol/L,以及附加成分中的GSH、GSSG.复性后蛋白抽干后再溶,溶液清亮透明,SDS-PAGE可见有寡聚体状态的蛋白.结论 成功构建了pET-30a整合酶表达质粒.纯化后蛋白的浓度较高.确定了最佳的蛋白复性液.并且初步检测了复性蛋白的物理稳定性.这为蛋白体外活性研究和AIDS药物研究打下了基础.
目的 對HIV-1整閤酶蛋白進行原覈錶達、純化以及複性研究.方法 從HIV-1 HXB2中PCR擴增齣全長的整閤酶基因,連入原覈錶達載體pET-30a中,得到pET-30a整閤酶錶達質粒.再將質粒轉人大腸桿菌BL21中誘導錶達,經鎳柱純化後得到整閤酶蛋白.純化後蛋白在FoldIt複性液中進行稀釋複性確定最佳複性液,然後蛋白在此條件下複性併用反相柱迴收,最後通過對複性蛋白抽榦及再溶分析複性蛋白的物理穩定性.結果 HIV-1整閤酶蛋白主要以包涵體形式錶達,錶達量佔菌體總量的10%.經鎳柱純化後蛋白的總濃度為0.9 mg/ml.蛋白的最佳複性液是:Tris-Cl 55 mmol/L,NaCl 264 mmol/L,KCl 11 mmol/L,Gu-HCl 550 mmol/L,EDTA 1.1 mmol/L,以及附加成分中的GSH、GSSG.複性後蛋白抽榦後再溶,溶液清亮透明,SDS-PAGE可見有寡聚體狀態的蛋白.結論 成功構建瞭pET-30a整閤酶錶達質粒.純化後蛋白的濃度較高.確定瞭最佳的蛋白複性液.併且初步檢測瞭複性蛋白的物理穩定性.這為蛋白體外活性研究和AIDS藥物研究打下瞭基礎.
목적 대HIV-1정합매단백진행원핵표체、순화이급복성연구.방법 종HIV-1 HXB2중PCR확증출전장적정합매기인,련입원핵표체재체pET-30a중,득도pET-30a정합매표체질립.재장질립전인대장간균BL21중유도표체,경얼주순화후득도정합매단백.순화후단백재FoldIt복성액중진행희석복성학정최가복성액,연후단백재차조건하복성병용반상주회수,최후통과대복성단백추간급재용분석복성단백적물리은정성.결과 HIV-1정합매단백주요이포함체형식표체,표체량점균체총량적10%.경얼주순화후단백적총농도위0.9 mg/ml.단백적최가복성액시:Tris-Cl 55 mmol/L,NaCl 264 mmol/L,KCl 11 mmol/L,Gu-HCl 550 mmol/L,EDTA 1.1 mmol/L,이급부가성분중적GSH、GSSG.복성후단백추간후재용,용액청량투명,SDS-PAGE가견유과취체상태적단백.결론 성공구건료pET-30a정합매표체질립.순화후단백적농도교고.학정료최가적단백복성액.병차초보검측료복성단백적물리은정성.저위단백체외활성연구화AIDS약물연구타하료기출.
