细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2005年
1期
39-42
,共4页
李容%熊冬生%许元富%邵晓枫%范冬梅%朱祯平%杨纯正
李容%熊鼕生%許元富%邵曉楓%範鼕梅%硃禎平%楊純正
리용%웅동생%허원부%소효풍%범동매%주정평%양순정
KDR%血管内皮生长因子%单链抗体%基因表达
KDR%血管內皮生長因子%單鏈抗體%基因錶達
KDR%혈관내피생장인자%단련항체%기인표체
目的: 构建并表达抗人血管内皮生长因子受体KDR单链抗体(scFv)蛋白, 并测定其生物学活性.方法: 设计合成抗KDR单抗(mAb)Ycom1D3 VH、VL引物, 通过重叠延伸拼接(splicing overlap extensive, SOE)PCR, 在VH和VL基因间引入柔性短肽(Gly4Ser)3, 构建抗KDR scFv基因并进行序列分析.将其克隆入pAYZH原核表达载体, 在大肠杆菌中诱导表达, 并以ELISA及免疫荧光结合实验测定重组蛋白的生物学活性.结果: 序列分析表明, 抗KDR scFv基因的全长为729 bp, 编码243个氨基酸.将重组体表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析显示, 融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为30 000, 同预期的结果一致.表达产物主要以不溶性包涵体的形式存在, 表达量占菌体总蛋白的20%.表达产物经变性、纯化及体外复性后, 纯度达90%以上.ELISA和竞争性免疫荧光结合实验显示, 重组小分子scFv可与可溶性KDR抗原及表达KDR受体的人脐静脉内皮细胞特异性结合, 保留了亲本mAb的抗原结合活性.结论: 成功地构建了抗KDR scFv基因, 并在大肠杆菌中功能性表达, 为靶向诊断、 治疗及进一步基因工程改造奠定了基础.
目的: 構建併錶達抗人血管內皮生長因子受體KDR單鏈抗體(scFv)蛋白, 併測定其生物學活性.方法: 設計閤成抗KDR單抗(mAb)Ycom1D3 VH、VL引物, 通過重疊延伸拼接(splicing overlap extensive, SOE)PCR, 在VH和VL基因間引入柔性短肽(Gly4Ser)3, 構建抗KDR scFv基因併進行序列分析.將其剋隆入pAYZH原覈錶達載體, 在大腸桿菌中誘導錶達, 併以ELISA及免疫熒光結閤實驗測定重組蛋白的生物學活性.結果: 序列分析錶明, 抗KDR scFv基因的全長為729 bp, 編碼243箇氨基痠.將重組體錶達產物進行SDS-PAGE及Western blot分析顯示, 融閤蛋白的相對分子質量(Mr)約為30 000, 同預期的結果一緻.錶達產物主要以不溶性包涵體的形式存在, 錶達量佔菌體總蛋白的20%.錶達產物經變性、純化及體外複性後, 純度達90%以上.ELISA和競爭性免疫熒光結閤實驗顯示, 重組小分子scFv可與可溶性KDR抗原及錶達KDR受體的人臍靜脈內皮細胞特異性結閤, 保留瞭親本mAb的抗原結閤活性.結論: 成功地構建瞭抗KDR scFv基因, 併在大腸桿菌中功能性錶達, 為靶嚮診斷、 治療及進一步基因工程改造奠定瞭基礎.
목적: 구건병표체항인혈관내피생장인자수체KDR단련항체(scFv)단백, 병측정기생물학활성.방법: 설계합성항KDR단항(mAb)Ycom1D3 VH、VL인물, 통과중첩연신병접(splicing overlap extensive, SOE)PCR, 재VH화VL기인간인입유성단태(Gly4Ser)3, 구건항KDR scFv기인병진행서렬분석.장기극륭입pAYZH원핵표체재체, 재대장간균중유도표체, 병이ELISA급면역형광결합실험측정중조단백적생물학활성.결과: 서렬분석표명, 항KDR scFv기인적전장위729 bp, 편마243개안기산.장중조체표체산물진행SDS-PAGE급Western blot분석현시, 융합단백적상대분자질량(Mr)약위30 000, 동예기적결과일치.표체산물주요이불용성포함체적형식존재, 표체량점균체총단백적20%.표체산물경변성、순화급체외복성후, 순도체90%이상.ELISA화경쟁성면역형광결합실험현시, 중조소분자scFv가여가용성KDR항원급표체KDR수체적인제정맥내피세포특이성결합, 보류료친본mAb적항원결합활성.결론: 성공지구건료항KDR scFv기인, 병재대장간균중공능성표체, 위파향진단、 치료급진일보기인공정개조전정료기출.
