CAJ | 학술논문

目的获取弓形虫RH株速殖子苹果酸脱氢酶(MDH)的cDNA全长序列,并对推导翻译出的氨基酸(aa)序列进行分析.方法将NCBI GenBank中登录的弓形虫MDH EST序列进行比对、拼接和电子延伸,发现近5'末端的部分核酸序列缺失.基于分析,设计的上游、下游引物分别包含起始密码子ATG和终止密码子TGA(TGA→UGA),使经RT-PCR扩增出的片段对应完整的CDS或者ORF.之后对MDH CDS推导翻译出的aa序列进行了保守功能域和同源性分析.结果本研究克隆的MDH的cDNA全长951bp,推导翻译出的蛋白质有316个aa组成,约35kDa,与预期大小接近.保守功能域分析表明,弓形虫MDH最接近类-乳酸脱氢酶型(lactate dehydrogenase-like)MDH,其准确定名缩写为LDH-like MDH,同时弓形虫MDH还具有其它脱氢酶类的特征.弓形虫MDH除与隐孢子虫和恶性疟原虫高度同源外,还与很多细菌等物种同源,但与人的同源性最低(22%).弓形虫MDH cDNA序列在NCBI GenBank中登录号为AY650028,对应aa序列的登录号为AAT67462.结论本研究首次获得了弓形虫MDH基因的全长cDNA序列和对应的aa序列.MDH是三羧酸循环中的重要酶类,该酶活性的改变,将直接影响弓形虫的存活.弓形虫MDH aa序列与人MDH蛋白间的同源性很低,提示基于MDH蛋白作为药靶,经高通量技术筛选抗弓形虫药具有可行性.
목적획취궁형충RH주속식자평과산탈경매(MDH)적cDNA전장서렬,병대추도번역출적안기산(aa)서렬진행분석.방법장NCBI GenBank중등록적궁형충MDH EST서렬진행비대、병접화전자연신,발현근5'말단적부분핵산서렬결실.기우분석,설계적상유、하유인물분별포함기시밀마자ATG화종지밀마자TGA(TGA→UGA),사경RT-PCR확증출적편단대응완정적CDS혹자ORF.지후대MDH CDS추도번역출적aa서렬진행료보수공능역화동원성분석.결과본연구극륭적MDH적cDNA전장951bp,추도번역출적단백질유316개aa조성,약35kDa,여예기대소접근.보수공능역분석표명,궁형충MDH최접근류-유산탈경매형(lactate dehydrogenase-like)MDH,기준학정명축사위LDH-like MDH,동시궁형충MDH환구유기타탈경매류적특정.궁형충MDH제여은포자충화악성학원충고도동원외,환여흔다세균등물충동원,단여인적동원성최저(22%).궁형충MDH cDNA서렬재NCBI GenBank중등록호위AY650028,대응aa서렬적등록호위AAT67462.결론본연구수차획득료궁형충MDH기인적전장cDNA서렬화대응적aa서렬.MDH시삼최산순배중적중요매류,해매활성적개변,장직접영향궁형충적존활.궁형충MDH aa서렬여인MDH단백간적동원성흔저,제시기우MDH단백작위약파,경고통량기술사선항궁형충약구유가행성.