目的: 研究化学合成经修饰抗金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)小干扰RNA(siRNA)对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的影响及其作用机制.方法: SD大鼠42只随机平均分成7组:正常组、阴性对照组、假手术组、模型组,治疗组(分3组,分别用0.05、0.1、0.2 mg/kg siRNA尾静脉注射).以400mL/LCCl4(3μL/g)sc诱导大鼠肝纤维化.8 wk后所有动物取肝组织标本,测门静脉血压(PVP)并经腹主动脉取血.常规HE染色和Van Gieson(VG)胶原染色,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CIV)和羟脯氨酸(HyP).应用荧光实时定量PCR法检测TIMP-2、Ⅰ型胶原纤维(COL Ⅰ)、Ⅲ型胶原纤维(COL Ⅲ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达.应用Western blot或明胶酶谱法检测TIMP-2、α-SMA和MMP-2蛋白的表达.结果: 各治疗组在应用抗TIMP-2 siRNA治疗后组织学病变减轻,PVP较模型组降低(2.2±0.1,1.9±0.1,1.6±0.1 kPa VS 2.7±0.1 kPa,P＜0.05),血清ALT和AST减少(2089.3±154.5,1869.8±138.0,1422.5±139.7 nkat/L vs 2717.2±193.8 nkat/L,P＜0.05;3634.1±242.7,2739.4±141.3,2286.6±145.5 nkat/L vs 4067.5±251.5 nkat/L,P＜0.05),反映肝纤维化指标的HA,LN,PCⅢ,CIV和HyP均显著低于模型组(176.0±10.2,160.6±9.3,109.9±9.4 μg/Lvs 206.3±17.0 μg/L,P＜0.05;93.1±8.2,71.4±7.5,55.9±7.3μg/L vs 116.6±10.8 μg/L,P＜0.05;71.2±6.1,64.1±5.1,53.6±4.3 μg/Lvs 91.2±8.9 μg/L,P＜0.05;64.3±5.4,50.7±5.8,41.6±4.4 μg/L vs 80.3±6.8μg/L,P＜0.05;328.7±17.6,279.7±16.3,230.4±16.1 μg/g vs380.7±20.6μg/g,P＜0.05).各治疗组TIMP-2,COL Ⅰ,COL Ⅲ和α-SMA mRNA的表达较模型组明显减少(7.53±0.83,5.04±0.75,1.30±0.49 vs 23.23±2.14,P＜0.05;33.38±2.85,22.80±2.48,11.45±1.27 vs 43.18±3.32,P＜0.05;19.23±1.95,13.21±1.35,10.11±1.09vs 25.90±2.23,P＜0.05;23.76±2.06,15.33±1.25,10.53±1.02 vs 34.85±3.16,P＜0.05),且TIMP-2,MMP-2和α-SMA蛋白的表达也相应减少(23.27±3.06,14.13±1.86,9.16±1.33vs 44.83±5.45,P＜0.05;23.80±2.14,15.58±1.52,9.52±0.93 vs 39.90±3.23,P＜0.05;24.58±2.59,19.29±2.31,13.40±1.98 vs 57.19±7.07,P＜0.05).结论: 化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA能显著降低TIMP-2的表达,促进细胞外基质的降解,抑制肝星状细胞的活化.
目的: 研究化學閤成經脩飾抗金屬蛋白酶組織抑製劑-2(TIMP-2)小榦擾RNA(siRNA)對CCl4誘導的大鼠肝纖維化的影響及其作用機製.方法: SD大鼠42隻隨機平均分成7組:正常組、陰性對照組、假手術組、模型組,治療組(分3組,分彆用0.05、0.1、0.2 mg/kg siRNA尾靜脈註射).以400mL/LCCl4(3μL/g)sc誘導大鼠肝纖維化.8 wk後所有動物取肝組織標本,測門靜脈血壓(PVP)併經腹主動脈取血.常規HE染色和Van Gieson(VG)膠原染色,檢測血清丙氨痠氨基轉移酶(ALT)、天鼕氨痠氨基轉移酶(AST)、透明質痠(HA)、層粘連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(CIV)和羥脯氨痠(HyP).應用熒光實時定量PCR法檢測TIMP-2、Ⅰ型膠原纖維(COL Ⅰ)、Ⅲ型膠原纖維(COL Ⅲ)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)mRNA的錶達.應用Western blot或明膠酶譜法檢測TIMP-2、α-SMA和MMP-2蛋白的錶達.結果: 各治療組在應用抗TIMP-2 siRNA治療後組織學病變減輕,PVP較模型組降低(2.2±0.1,1.9±0.1,1.6±0.1 kPa VS 2.7±0.1 kPa,P＜0.05),血清ALT和AST減少(2089.3±154.5,1869.8±138.0,1422.5±139.7 nkat/L vs 2717.2±193.8 nkat/L,P＜0.05;3634.1±242.7,2739.4±141.3,2286.6±145.5 nkat/L vs 4067.5±251.5 nkat/L,P＜0.05),反映肝纖維化指標的HA,LN,PCⅢ,CIV和HyP均顯著低于模型組(176.0±10.2,160.6±9.3,109.9±9.4 μg/Lvs 206.3±17.0 μg/L,P＜0.05;93.1±8.2,71.4±7.5,55.9±7.3μg/L vs 116.6±10.8 μg/L,P＜0.05;71.2±6.1,64.1±5.1,53.6±4.3 μg/Lvs 91.2±8.9 μg/L,P＜0.05;64.3±5.4,50.7±5.8,41.6±4.4 μg/L vs 80.3±6.8μg/L,P＜0.05;328.7±17.6,279.7±16.3,230.4±16.1 μg/g vs380.7±20.6μg/g,P＜0.05).各治療組TIMP-2,COL Ⅰ,COL Ⅲ和α-SMA mRNA的錶達較模型組明顯減少(7.53±0.83,5.04±0.75,1.30±0.49 vs 23.23±2.14,P＜0.05;33.38±2.85,22.80±2.48,11.45±1.27 vs 43.18±3.32,P＜0.05;19.23±1.95,13.21±1.35,10.11±1.09vs 25.90±2.23,P＜0.05;23.76±2.06,15.33±1.25,10.53±1.02 vs 34.85±3.16,P＜0.05),且TIMP-2,MMP-2和α-SMA蛋白的錶達也相應減少(23.27±3.06,14.13±1.86,9.16±1.33vs 44.83±5.45,P＜0.05;23.80±2.14,15.58±1.52,9.52±0.93 vs 39.90±3.23,P＜0.05;24.58±2.59,19.29±2.31,13.40±1.98 vs 57.19±7.07,P＜0.05).結論: 化學閤成經脩飾抗TIMP-2 siRNA能顯著降低TIMP-2的錶達,促進細胞外基質的降解,抑製肝星狀細胞的活化.
목적: 연구화학합성경수식항금속단백매조직억제제-2(TIMP-2)소간우RNA(siRNA)대CCl4유도적대서간섬유화적영향급기작용궤제.방법: SD대서42지수궤평균분성7조:정상조、음성대조조、가수술조、모형조,치료조(분3조,분별용0.05、0.1、0.2 mg/kg siRNA미정맥주사).이400mL/LCCl4(3μL/g)sc유도대서간섬유화.8 wk후소유동물취간조직표본,측문정맥혈압(PVP)병경복주동맥취혈.상규HE염색화Van Gieson(VG)효원염색,검측혈청병안산안기전이매(ALT)、천동안산안기전이매(AST)、투명질산(HA)、층점련단백(LN)、Ⅲ형전효원(PCⅢ)、Ⅳ형효원(CIV)화간포안산(HyP).응용형광실시정량PCR법검측TIMP-2、Ⅰ형효원섬유(COL Ⅰ)、Ⅲ형효원섬유(COL Ⅲ)화α-평활기기동단백(α-SMA)mRNA적표체.응용Western blot혹명효매보법검측TIMP-2、α-SMA화MMP-2단백적표체.결과: 각치료조재응용항TIMP-2 siRNA치료후조직학병변감경,PVP교모형조강저(2.2±0.1,1.9±0.1,1.6±0.1 kPa VS 2.7±0.1 kPa,P＜0.05),혈청ALT화AST감소(2089.3±154.5,1869.8±138.0,1422.5±139.7 nkat/L vs 2717.2±193.8 nkat/L,P＜0.05;3634.1±242.7,2739.4±141.3,2286.6±145.5 nkat/L vs 4067.5±251.5 nkat/L,P＜0.05),반영간섬유화지표적HA,LN,PCⅢ,CIV화HyP균현저저우모형조(176.0±10.2,160.6±9.3,109.9±9.4 μg/Lvs 206.3±17.0 μg/L,P＜0.05;93.1±8.2,71.4±7.5,55.9±7.3μg/L vs 116.6±10.8 μg/L,P＜0.05;71.2±6.1,64.1±5.1,53.6±4.3 μg/Lvs 91.2±8.9 μg/L,P＜0.05;64.3±5.4,50.7±5.8,41.6±4.4 μg/L vs 80.3±6.8μg/L,P＜0.05;328.7±17.6,279.7±16.3,230.4±16.1 μg/g vs380.7±20.6μg/g,P＜0.05).각치료조TIMP-2,COL Ⅰ,COL Ⅲ화α-SMA mRNA적표체교모형조명현감소(7.53±0.83,5.04±0.75,1.30±0.49 vs 23.23±2.14,P＜0.05;33.38±2.85,22.80±2.48,11.45±1.27 vs 43.18±3.32,P＜0.05;19.23±1.95,13.21±1.35,10.11±1.09vs 25.90±2.23,P＜0.05;23.76±2.06,15.33±1.25,10.53±1.02 vs 34.85±3.16,P＜0.05),차TIMP-2,MMP-2화α-SMA단백적표체야상응감소(23.27±3.06,14.13±1.86,9.16±1.33vs 44.83±5.45,P＜0.05;23.80±2.14,15.58±1.52,9.52±0.93 vs 39.90±3.23,P＜0.05;24.58±2.59,19.29±2.31,13.40±1.98 vs 57.19±7.07,P＜0.05).결론: 화학합성경수식항TIMP-2 siRNA능현저강저TIMP-2적표체,촉진세포외기질적강해,억제간성상세포적활화.
