生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
227-229
,共3页
刘丽凡%韩文瑜%赵瑞丽%王好
劉麗凡%韓文瑜%趙瑞麗%王好
류려범%한문유%조서려%왕호
乳酸菌素%Gassericin T%基因合成%组成型表达%启动子
乳痠菌素%Gassericin T%基因閤成%組成型錶達%啟動子
유산균소%Gassericin T%기인합성%조성형표체%계동자
目的:为了研究乳酸菌素Gassericin T的作用机制及应用价值,人工合成Gassericin T基因并构建能高效表达外源蛋白的毕赤酵母组成型表达载体.方法:应用PCR方法从毕赤酵母染色体中扩增GAP启动子,经测序正确后与已线性化的不含pAOX1启动子的毕赤酵母诱导型表达载体pPIC9K连接,转化大肠杆菌DH5α.根据Gassericin T的基因序列,把Gassericin T的结构基因gatA的密码子转换成毕赤酵母偏爱的形式,设计了6条59 nt的寡聚核苷酸引物,通过3次连续PCR反应,人工合成gatA片段(简称gat基因),经测序正确后插入pGAP9K质粒的多克隆位点.结果:用GAP启动子(pGAP)取代了pPIC9K上的pAOX1,构建了毕赤酵母组成型表达载体pGAP9K;PCR拼接获得250 bp的目的基因序列,将目的基因克隆于pGAP9K,获得组成型表达载体pGAP9K-gat.结论:为下一步在毕赤酵母中组成型表达外源蛋白,研究其作用机理和遗传机制奠定了基础.
目的:為瞭研究乳痠菌素Gassericin T的作用機製及應用價值,人工閤成Gassericin T基因併構建能高效錶達外源蛋白的畢赤酵母組成型錶達載體.方法:應用PCR方法從畢赤酵母染色體中擴增GAP啟動子,經測序正確後與已線性化的不含pAOX1啟動子的畢赤酵母誘導型錶達載體pPIC9K連接,轉化大腸桿菌DH5α.根據Gassericin T的基因序列,把Gassericin T的結構基因gatA的密碼子轉換成畢赤酵母偏愛的形式,設計瞭6條59 nt的寡聚覈苷痠引物,通過3次連續PCR反應,人工閤成gatA片段(簡稱gat基因),經測序正確後插入pGAP9K質粒的多剋隆位點.結果:用GAP啟動子(pGAP)取代瞭pPIC9K上的pAOX1,構建瞭畢赤酵母組成型錶達載體pGAP9K;PCR拼接穫得250 bp的目的基因序列,將目的基因剋隆于pGAP9K,穫得組成型錶達載體pGAP9K-gat.結論:為下一步在畢赤酵母中組成型錶達外源蛋白,研究其作用機理和遺傳機製奠定瞭基礎.
목적:위료연구유산균소Gassericin T적작용궤제급응용개치,인공합성Gassericin T기인병구건능고효표체외원단백적필적효모조성형표체재체.방법:응용PCR방법종필적효모염색체중확증GAP계동자,경측서정학후여이선성화적불함pAOX1계동자적필적효모유도형표체재체pPIC9K련접,전화대장간균DH5α.근거Gassericin T적기인서렬,파Gassericin T적결구기인gatA적밀마자전환성필적효모편애적형식,설계료6조59 nt적과취핵감산인물,통과3차련속PCR반응,인공합성gatA편단(간칭gat기인),경측서정학후삽입pGAP9K질립적다극륭위점.결과:용GAP계동자(pGAP)취대료pPIC9K상적pAOX1,구건료필적효모조성형표체재체pGAP9K;PCR병접획득250 bp적목적기인서렬,장목적기인극륭우pGAP9K,획득조성형표체재체pGAP9K-gat.결론:위하일보재필적효모중조성형표체외원단백,연구기작용궤리화유전궤제전정료기출.
