CAJ | 학술논문

目的:观察神经干细胞在聚乳酸-羟基乙酸支架上的生长和分化行为,探讨组织工程体外构建人工脊髓修复脊髓损伤.方法:实验于2005-10/2006-06在南京医科大学第一附属医院中心实验室完成.①在聚乳酸-羟基乙酸支架(孔径200～300 μm,孔隙率90%,聚乳酸/聚羟基乙酸=75:25;山东医疗器械研究所)上种植孕14 d的胚胎大鼠脑细胞,培养7 d.②将培养7 d的聚乳酸-羟基乙酸支架置入含体积分数为0.05的胎牛血清和含脑源性神经营养因子20 μg/L的DMEM/F12培养基中继续培养5 d,诱导其向神经元分化.③用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞在聚乳酸-羟基乙酸支架上的生长和分化行为;应用免疫组织化学鉴定聚乳酸-羟基乙酸支架上培养的细胞.结果:①神经干细胞生长形态:神经干细胞克隆球充满聚乳酸-羟基乙酸支架孔隙,其形状近似孔L隙的不规则几何形状.②神经干细胞超微结构:诱导分化后,大量神经干细胞长出的神经突触跨越支架孔隙的三维空间结构,布满支架的表面和孔隙,并彼此建立了突触联系.③诱导分化前后的聚乳酸-羟基乙酸石蜡切片免疫组织化学鉴定结果:诱导分化前后免疫组织化学鉴定分别为巢蛋白和微管相关蛋白2抗体阳性,说明诱导分化前是神经干细胞,诱导分化后有神经元形成.结论:聚乳酸-羟基乙酸适合神经干细胞的生长和分化,其孔隙结构规范调节了神经干细胞生长增殖的空间排列,而脑源性神经营养因子调控了神经干细胞的分化方向,可以利用该支架的空间结构和细胞因子适度调控神经干细胞在聚乳酸-羟基乙酸上的生长和分化构建脊髓组织.
목적:관찰신경간세포재취유산-간기을산지가상적생장화분화행위,탐토조직공정체외구건인공척수수복척수손상.방법:실험우2005-10/2006-06재남경의과대학제일부속의원중심실험실완성.①재취유산-간기을산지가(공경200～300 μm,공극솔90%,취유산/취간기을산=75:25;산동의료기계연구소)상충식잉14 d적배태대서뇌세포,배양7 d.②장배양7 d적취유산-간기을산지가치입함체적분수위0.05적태우혈청화함뇌원성신경영양인자20 μg/L적DMEM/F12배양기중계속배양5 d,유도기향신경원분화.③용도치상차현미경화소묘전경관찰세포재취유산-간기을산지가상적생장화분화행위;응용면역조직화학감정취유산-간기을산지가상배양적세포.결과:①신경간세포생장형태:신경간세포극륭구충만취유산-간기을산지가공극,기형상근사공L극적불규칙궤하형상.②신경간세포초미결구:유도분화후,대량신경간세포장출적신경돌촉과월지가공극적삼유공간결구,포만지가적표면화공극,병피차건립료돌촉련계.③유도분화전후적취유산-간기을산석사절편면역조직화학감정결과:유도분화전후면역조직화학감정분별위소단백화미관상관단백2항체양성,설명유도분화전시신경간세포,유도분화후유신경원형성.결론:취유산-간기을산괄합신경간세포적생장화분화,기공극결구규범조절료신경간세포생장증식적공간배렬,이뇌원성신경영양인자조공료신경간세포적분화방향,가이이용해지가적공간결구화세포인자괄도조공신경간세포재취유산-간기을산상적생장화분화구건척수조직.