第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2008年
2期
134-137
,共4页
魏勇%应大君%朱楚洪%侯春丽%崔晓萍
魏勇%應大君%硃楚洪%侯春麗%崔曉萍
위용%응대군%주초홍%후춘려%최효평
人工锌指蛋白%真核表达载体%EGFP%COS-7细胞
人工鋅指蛋白%真覈錶達載體%EGFP%COS-7細胞
인공자지단백%진핵표체재체%EGFP%COS-7세포
目的 构建人工锌指蛋白ZFP基因的真核表达载体,检测其在真核细胞的表达情况,从而探讨人工锌指蛋白作为人工转录因子DNA结合域的可能性.方法 全基因合成人工锌指蛋白(putative zinc finger protein,ZFP)的核酸序列并克隆入pEGFP-N1及pIRES2-EGFP真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-N1/ZFP及pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,通过酶切、菌落PCR及测序来鉴定重组载体的正确性.脂质体DOTAP体外转染重组质粒于COS-7细胞中,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot方法鉴定ZFP在该细胞中的表达.结果 正确构建了pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag重组表达质粒,并且在COS-7细胞中成功进行了人工锌指蛋白ZFP的表达.结论 采用生物信息学手段获得的假定的锌指蛋白基因序列可以在真核细胞内正常表达.
目的 構建人工鋅指蛋白ZFP基因的真覈錶達載體,檢測其在真覈細胞的錶達情況,從而探討人工鋅指蛋白作為人工轉錄因子DNA結閤域的可能性.方法 全基因閤成人工鋅指蛋白(putative zinc finger protein,ZFP)的覈痠序列併剋隆入pEGFP-N1及pIRES2-EGFP真覈錶達載體中,構建重組質粒pEGFP-N1/ZFP及pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,通過酶切、菌落PCR及測序來鑒定重組載體的正確性.脂質體DOTAP體外轉染重組質粒于COS-7細胞中,用熒光顯微鏡、RT-PCR、Western blot方法鑒定ZFP在該細胞中的錶達.結果 正確構建瞭pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag重組錶達質粒,併且在COS-7細胞中成功進行瞭人工鋅指蛋白ZFP的錶達.結論 採用生物信息學手段穫得的假定的鋅指蛋白基因序列可以在真覈細胞內正常錶達.
목적 구건인공자지단백ZFP기인적진핵표체재체,검측기재진핵세포적표체정황,종이탐토인공자지단백작위인공전록인자DNA결합역적가능성.방법 전기인합성인공자지단백(putative zinc finger protein,ZFP)적핵산서렬병극륭입pEGFP-N1급pIRES2-EGFP진핵표체재체중,구건중조질립pEGFP-N1/ZFP급pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,통과매절、균락PCR급측서래감정중조재체적정학성.지질체DOTAP체외전염중조질립우COS-7세포중,용형광현미경、RT-PCR、Western blot방법감정ZFP재해세포중적표체.결과 정학구건료pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag중조표체질립,병차재COS-7세포중성공진행료인공자지단백ZFP적표체.결론 채용생물신식학수단획득적가정적자지단백기인서렬가이재진핵세포내정상표체.
