四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2009年
3期
369-373
,共5页
丁振宇%王椿%宿静梅%魏于全%王春婷
丁振宇%王椿%宿靜梅%魏于全%王春婷
정진우%왕춘%숙정매%위우전%왕춘정
端粒酶逆转录酶%腺病毒%肿瘤疫苗
耑粒酶逆轉錄酶%腺病毒%腫瘤疫苗
단립매역전록매%선병독%종류역묘
目的 采用细胞菌内同源重组法构建人端粒酶逆转录酶(hTRT)重组腺病毒,并将其以甘露聚糖进行表面修饰,以探索构建一种新型的体内靶向树突状细胞(DC)的通用型肿瘤抗原. 方法将编码hTRT的cDNA序列自pBABE-PURO-hTERT质粒亚克隆至腺病毒质粒pAdTrack-CMV中,将后者与骨架质粒pAdEasy-1经电冲击共转化宿主菌BJ5183进行同源重组.经过克隆筛选获得正确的重组腺病毒质粒后,将其线性化转染293细胞包装获得重组腺病毒.将重组腺病毒扩增纯化,以甘露聚糖进行表面修饰.最后将甘露聚糖修饰后的腺病毒免疫小鼠. 结果重组腺病毒能在293细胞产生细胞病变效应(CPE),腺病毒转染后的细胞通过PCR及免疫印迹能测到hTRT的表达.重组腺病毒经过甘露聚糖修饰后,经高碘酸席碱染色呈阳性.重组腺病毒能在小鼠体内靶向脾脏DC细胞. 结论成功构建能体内靶向DC细胞的hTRT重组腺病毒,为通用型肿瘤疫苗的研发作出了新的探索.
目的 採用細胞菌內同源重組法構建人耑粒酶逆轉錄酶(hTRT)重組腺病毒,併將其以甘露聚糖進行錶麵脩飾,以探索構建一種新型的體內靶嚮樹突狀細胞(DC)的通用型腫瘤抗原. 方法將編碼hTRT的cDNA序列自pBABE-PURO-hTERT質粒亞剋隆至腺病毒質粒pAdTrack-CMV中,將後者與骨架質粒pAdEasy-1經電遲擊共轉化宿主菌BJ5183進行同源重組.經過剋隆篩選穫得正確的重組腺病毒質粒後,將其線性化轉染293細胞包裝穫得重組腺病毒.將重組腺病毒擴增純化,以甘露聚糖進行錶麵脩飾.最後將甘露聚糖脩飾後的腺病毒免疫小鼠. 結果重組腺病毒能在293細胞產生細胞病變效應(CPE),腺病毒轉染後的細胞通過PCR及免疫印跡能測到hTRT的錶達.重組腺病毒經過甘露聚糖脩飾後,經高碘痠席堿染色呈暘性.重組腺病毒能在小鼠體內靶嚮脾髒DC細胞. 結論成功構建能體內靶嚮DC細胞的hTRT重組腺病毒,為通用型腫瘤疫苗的研髮作齣瞭新的探索.
목적 채용세포균내동원중조법구건인단립매역전록매(hTRT)중조선병독,병장기이감로취당진행표면수식,이탐색구건일충신형적체내파향수돌상세포(DC)적통용형종류항원. 방법장편마hTRT적cDNA서렬자pBABE-PURO-hTERT질립아극륭지선병독질립pAdTrack-CMV중,장후자여골가질립pAdEasy-1경전충격공전화숙주균BJ5183진행동원중조.경과극륭사선획득정학적중조선병독질립후,장기선성화전염293세포포장획득중조선병독.장중조선병독확증순화,이감로취당진행표면수식.최후장감로취당수식후적선병독면역소서. 결과중조선병독능재293세포산생세포병변효응(CPE),선병독전염후적세포통과PCR급면역인적능측도hTRT적표체.중조선병독경과감로취당수식후,경고전산석감염색정양성.중조선병독능재소서체내파향비장DC세포. 결론성공구건능체내파향DC세포적hTRT중조선병독,위통용형종류역묘적연발작출료신적탐색.
