中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2009年
6期
800-804
,共5页
周立冬%侯琳%宋金莲%葛银林%岳旺%欧阳奇琦
週立鼕%侯琳%宋金蓮%葛銀林%嶽旺%歐暘奇琦
주입동%후림%송금련%갈은림%악왕%구양기기
2,3-吲哚醌%凋亡%SH-SY5Y细胞%survivin%p53%Caspase-3
2,3-吲哚醌%凋亡%SH-SY5Y細胞%survivin%p53%Caspase-3
2,3-신타곤%조망%SH-SY5Y세포%survivin%p53%Caspase-3
目的 研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline, isatin,ISA)在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y) 分泌肿瘤凋亡抑制因子survivin的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(100、200、400 μmol*L-1)处理组,采用荧光染色、DNA Ladder分析细胞凋亡,RT-PCR及Western blot等方法 检测不同浓度ISA作用后survivin及p53在mRNA和蛋白水平的变化,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测Caspase-3蛋白水平的变化.结果 ISA(100、200、400 μmol*L-1)作用SH-SY5Y细胞48 h后,在荧光显微镜下观察到400 μmol*L-1 ISA组细胞出现典型的凋亡形态学改变:核染色质聚集、核碎裂、胞质浓缩;琼脂糖凝胶电泳显示400 μmol*L-1 ISA处理组细胞出现明显的梯形条带;RT-PCR及Western blot显示:随着ISA药物浓度的增加,survivin mRNA及蛋白表达逐渐减少(P<0.05),野生型p53 mRNA及蛋白表达水平逐渐增加,各用药组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),并呈现浓度依赖关系;FCM结果显示随着ISA药物浓度的增加,活化Caspase-3的表达率分别为18.38%、26.93%、35.66%,明显高于对照组(11.23%,P<0.05).结论 ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡,可能机制是抑制凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的生存蛋白(survivin)表达继而增加活化Caspase-3水平来实现的,而这一过程可能与ISA上调野生型p53的表达有关.
目的 研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline, isatin,ISA)在體外對人神經母瘤細胞(SH-SY5Y) 分泌腫瘤凋亡抑製因子survivin的影響,併探討其作用機製.方法 體外培養人神經母細胞瘤細胞SH-SY5Y細胞,將SH-SY5Y細胞隨機分為對照組和ISA不同濃度(100、200、400 μmol*L-1)處理組,採用熒光染色、DNA Ladder分析細胞凋亡,RT-PCR及Western blot等方法 檢測不同濃度ISA作用後survivin及p53在mRNA和蛋白水平的變化,流式細胞術(flow cytometry,FCM)檢測Caspase-3蛋白水平的變化.結果 ISA(100、200、400 μmol*L-1)作用SH-SY5Y細胞48 h後,在熒光顯微鏡下觀察到400 μmol*L-1 ISA組細胞齣現典型的凋亡形態學改變:覈染色質聚集、覈碎裂、胞質濃縮;瓊脂糖凝膠電泳顯示400 μmol*L-1 ISA處理組細胞齣現明顯的梯形條帶;RT-PCR及Western blot顯示:隨著ISA藥物濃度的增加,survivin mRNA及蛋白錶達逐漸減少(P<0.05),野生型p53 mRNA及蛋白錶達水平逐漸增加,各用藥組與對照組比較差異均有統計學意義(P<0.05),併呈現濃度依賴關繫;FCM結果顯示隨著ISA藥物濃度的增加,活化Caspase-3的錶達率分彆為18.38%、26.93%、35.66%,明顯高于對照組(11.23%,P<0.05).結論 ISA能明顯誘導SH-SY5Y細胞凋亡,可能機製是抑製凋亡抑製蛋白(IAP)傢族中的生存蛋白(survivin)錶達繼而增加活化Caspase-3水平來實現的,而這一過程可能與ISA上調野生型p53的錶達有關.
목적 연구2,3-신타곤(2,3-dioxoindoline, isatin,ISA)재체외대인신경모류세포(SH-SY5Y) 분비종류조망억제인자survivin적영향,병탐토기작용궤제.방법 체외배양인신경모세포류세포SH-SY5Y세포,장SH-SY5Y세포수궤분위대조조화ISA불동농도(100、200、400 μmol*L-1)처리조,채용형광염색、DNA Ladder분석세포조망,RT-PCR급Western blot등방법 검측불동농도ISA작용후survivin급p53재mRNA화단백수평적변화,류식세포술(flow cytometry,FCM)검측Caspase-3단백수평적변화.결과 ISA(100、200、400 μmol*L-1)작용SH-SY5Y세포48 h후,재형광현미경하관찰도400 μmol*L-1 ISA조세포출현전형적조망형태학개변:핵염색질취집、핵쇄렬、포질농축;경지당응효전영현시400 μmol*L-1 ISA처리조세포출현명현적제형조대;RT-PCR급Western blot현시:수착ISA약물농도적증가,survivin mRNA급단백표체축점감소(P<0.05),야생형p53 mRNA급단백표체수평축점증가,각용약조여대조조비교차이균유통계학의의(P<0.05),병정현농도의뢰관계;FCM결과현시수착ISA약물농도적증가,활화Caspase-3적표체솔분별위18.38%、26.93%、35.66%,명현고우대조조(11.23%,P<0.05).결론 ISA능명현유도SH-SY5Y세포조망,가능궤제시억제조망억제단백(IAP)가족중적생존단백(survivin)표체계이증가활화Caspase-3수평래실현적,이저일과정가능여ISA상조야생형p53적표체유관.
