农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
4期
783-787
,共5页
黄飞%吴高兵%黄小罗%洪玉枝
黃飛%吳高兵%黃小囉%洪玉枝
황비%오고병%황소라%홍옥지
丝氨酸羟甲基转移酶%亲和层析%嗜水气单胞菌
絲氨痠羥甲基轉移酶%親和層析%嗜水氣單胞菌
사안산간갑기전이매%친화층석%기수기단포균
以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)基因组DNA为模板,通过PCR方法首次克隆了该菌的丝氨酸羟甲基转移酶基因(glyA).将该基因插入到表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,获得含有重组质粒pGEX-glyA的重组菌株.核苷酸序列测定表明该基因(GenBank登录号:FJ797607)全长1 254 bp,编码417个氨基酸.重组菌株IPTG诱导表达后,经过GST-tag亲和层析纯化,得到约45 kD的目的蛋白.对纯化的丝氨酸羟甲基转移酶进行酶学性质分析表明,该酶的最适反应为pH 8.0,最适反应温度为20℃,Cu2+和Mn2+对该酶有激活作用,而Zn2+和SDS对该酶有抑制作用.由于该酶的最适反应温度是20℃,使得它在工业上具有一定的应用价值,同时有助于对低温酶机制的研究.
以嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)基因組DNA為模闆,通過PCR方法首次剋隆瞭該菌的絲氨痠羥甲基轉移酶基因(glyA).將該基因插入到錶達載體pGEX-6p-1中,轉化大腸桿菌(Escherichia coli)DH5α,穫得含有重組質粒pGEX-glyA的重組菌株.覈苷痠序列測定錶明該基因(GenBank登錄號:FJ797607)全長1 254 bp,編碼417箇氨基痠.重組菌株IPTG誘導錶達後,經過GST-tag親和層析純化,得到約45 kD的目的蛋白.對純化的絲氨痠羥甲基轉移酶進行酶學性質分析錶明,該酶的最適反應為pH 8.0,最適反應溫度為20℃,Cu2+和Mn2+對該酶有激活作用,而Zn2+和SDS對該酶有抑製作用.由于該酶的最適反應溫度是20℃,使得它在工業上具有一定的應用價值,同時有助于對低溫酶機製的研究.
이기수기단포균(Aeromonas hydrophila)기인조DNA위모판,통과PCR방법수차극륭료해균적사안산간갑기전이매기인(glyA).장해기인삽입도표체재체pGEX-6p-1중,전화대장간균(Escherichia coli)DH5α,획득함유중조질립pGEX-glyA적중조균주.핵감산서렬측정표명해기인(GenBank등록호:FJ797607)전장1 254 bp,편마417개안기산.중조균주IPTG유도표체후,경과GST-tag친화층석순화,득도약45 kD적목적단백.대순화적사안산간갑기전이매진행매학성질분석표명,해매적최괄반응위pH 8.0,최괄반응온도위20℃,Cu2+화Mn2+대해매유격활작용,이Zn2+화SDS대해매유억제작용.유우해매적최괄반응온도시20℃,사득타재공업상구유일정적응용개치,동시유조우대저온매궤제적연구.
