CAJ | 학술논문

目的探讨丁型肝炎病毒(HDV)核酶在细胞内抑制丙型肝炎病毒(HCV)RNA的可能性. 方法针对HCV-5′NCR-C RNA的不同靶位构建了pC1-RzC1(107～113nt)、pC1-RzC2(268～274nt)、pC1-RzC3(345～351nt)3个HDV核酶重组真核表达载体,采用脂质体介导将它们转染至HCV阳性胎肝细胞中,通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞和培养上清液中的HCV RNA,初步探讨HDV核酶对HCV RNA的抑制活性. 结果 (1)重组表达载体通过PCR、酶切和碱基序列测定证实了3组HDV核酶定向插入到真核表达载体.(2)免疫组织化学观察到HCV阳性胎肝细胞中HCV NS3、NS5抗原及逆转录-PCR法检测胎肝细胞及上清液中的HCV RNA正、负链,同时利用Light Cycler荧光PCR定量检测HCV RNA的含量,证明HCV感染胎肝细胞成功.(3)HCV阳性胎肝细胞中HDV核酶对全长HCV RNA的抑制活性,当剂量为0.5μmol/L时,pC1-RzC1、pC1-RzC2、pC1-RzC3抑制活性分别为53.2%、50.5%、10.6%(t＝5.25,P<0.01).pC1-RzC1连续1周作用于HCV阳性的胎肝细胞,结果显示第2～7天的抑制活性分别是60.7%、64.2%、68.4%、71.9%、78.8%、83.1%(t＝15.34,P<0.01). 结论 pC1-RzC1、pC1-RzC2在HCV阳性胎肝细胞中对HCV RNA的抑制活性明显高于pC1-RzC3.
목적탐토정형간염병독(HDV)핵매재세포내억제병형간염병독(HCV)RNA적가능성. 방법침대HCV-5′NCR-C RNA적불동파위구건료pC1-RzC1(107～113nt)、pC1-RzC2(268～274nt)、pC1-RzC3(345～351nt)3개HDV핵매중조진핵표체재체,채용지질체개도장타문전염지HCV양성태간세포중,통과형광정량취합매련반응(PCR)검측세포화배양상청액중적HCV RNA,초보탐토HDV핵매대HCV RNA적억제활성. 결과 (1)중조표체재체통과PCR、매절화감기서렬측정증실료3조HDV핵매정향삽입도진핵표체재체.(2)면역조직화학관찰도HCV양성태간세포중HCV NS3、NS5항원급역전록-PCR법검측태간세포급상청액중적HCV RNA정、부련,동시이용Light Cycler형광PCR정량검측HCV RNA적함량,증명HCV감염태간세포성공.(3)HCV양성태간세포중HDV핵매대전장HCV RNA적억제활성,당제량위0.5μmol/L시,pC1-RzC1、pC1-RzC2、pC1-RzC3억제활성분별위53.2%、50.5%、10.6%(t＝5.25,P<0.01).pC1-RzC1련속1주작용우HCV양성적태간세포,결과현시제2～7천적억제활성분별시60.7%、64.2%、68.4%、71.9%、78.8%、83.1%(t＝15.34,P<0.01). 결론 pC1-RzC1、pC1-RzC2재HCV양성태간세포중대HCV RNA적억제활성명현고우pC1-RzC3.