第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2003年
23期
2132-2135
,共4页
岳乔红%于文彬%郝晓柯%别良峰%程晓东%苏明权%杨柳
嶽喬紅%于文彬%郝曉柯%彆良峰%程曉東%囌明權%楊柳
악교홍%우문빈%학효가%별량봉%정효동%소명권%양류
羧肽酶A1%活性中心%基因克隆%原核表达
羧肽酶A1%活性中心%基因剋隆%原覈錶達
최태매A1%활성중심%기인극륭%원핵표체
目的: 克隆人羧肽酶A1(carboxypeptidase A1, CPA1)活性中心基因,构建重组表达载体并对其进行诱导表达. 方法: 通过RT-PCR方法扩增出正常胰腺组织中CPA1活性中心基因,克隆入载体pGEM-T easy,测序分析. 将该目的基因亚克隆于表达载体pGEX-4T-1,测序证实序列正确后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达重组蛋白. 结果: 获得了人CPA1活性中心基因,构建了重组表达质粒,表达的蛋白以SDS-PAGE分析,在Mr约46 000处出现一条新生蛋白带,经凝胶薄层扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的22.1%. 结论: 成功克隆人CPA1活性中心基因并得到了其原核表达产物,为获得分子量小而具有相似活性的蛋白奠定了基础.
目的: 剋隆人羧肽酶A1(carboxypeptidase A1, CPA1)活性中心基因,構建重組錶達載體併對其進行誘導錶達. 方法: 通過RT-PCR方法擴增齣正常胰腺組織中CPA1活性中心基因,剋隆入載體pGEM-T easy,測序分析. 將該目的基因亞剋隆于錶達載體pGEX-4T-1,測序證實序列正確後轉化大腸桿菌DH5α,經IPTG誘導錶達重組蛋白. 結果: 穫得瞭人CPA1活性中心基因,構建瞭重組錶達質粒,錶達的蛋白以SDS-PAGE分析,在Mr約46 000處齣現一條新生蛋白帶,經凝膠薄層掃描檢測,錶達量約佔菌體總蛋白的22.1%. 結論: 成功剋隆人CPA1活性中心基因併得到瞭其原覈錶達產物,為穫得分子量小而具有相似活性的蛋白奠定瞭基礎.
목적: 극륭인최태매A1(carboxypeptidase A1, CPA1)활성중심기인,구건중조표체재체병대기진행유도표체. 방법: 통과RT-PCR방법확증출정상이선조직중CPA1활성중심기인,극륭입재체pGEM-T easy,측서분석. 장해목적기인아극륭우표체재체pGEX-4T-1,측서증실서렬정학후전화대장간균DH5α,경IPTG유도표체중조단백. 결과: 획득료인CPA1활성중심기인,구건료중조표체질립,표체적단백이SDS-PAGE분석,재Mr약46 000처출현일조신생단백대,경응효박층소묘검측,표체량약점균체총단백적22.1%. 결론: 성공극륭인CPA1활성중심기인병득도료기원핵표체산물,위획득분자량소이구유상사활성적단백전정료기출.
