眼科新进展
眼科新進展
안과신진전
RECENT ADVANCES IN OPHTHALMOLOGY
2005年
1期
11-13
,共3页
宋忆淑%李玉新%费向东%鲍永利%谭大鹏
宋憶淑%李玉新%費嚮東%鮑永利%譚大鵬
송억숙%리옥신%비향동%포영리%담대붕
s-lap基因%克隆%s-lap/GFP%融合蛋白%基因表达%基因定位
s-lap基因%剋隆%s-lap/GFP%融閤蛋白%基因錶達%基因定位
s-lap기인%극륭%s-lap/GFP%융합단백%기인표체%기인정위
目的克隆新基因s-lap编码区序列,研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位.方法分析s-lap cDNA序列,建立视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞光损伤模型,RT-PCR克隆其编码区序列,构建了带有绿色荧光蛋白的目的基因真核表达重组质粒pcDNA3.1-GFP/s-lap,转染B16黑色素瘤细胞,观察s-lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位.结果 s-lap cDNA序列含有编码101个氨基酸的开放读码框架,有2个可能的N-糖基化位点,1个可能的casein kinase II 磷酸化位点和2个可能的 PKC磷酸化位点;成功地克隆了s-lap蛋白编码区序列,构建了其真核表达载体,荧光显微镜观察,在转染pcDNA3.1-GFP质粒的B16黑色素瘤细胞中,荧光呈网状分布于细胞浆内,而细胞核内低表达;在转染s-lap/GFP融合基因的B16黑色素瘤细胞中,荧光均匀分布于整个细胞,尤其以细胞核内高表达.结论新基因s-lap编码的蛋白质可在B16黑色素瘤细胞中获得表达,并以细胞核内高表达.
目的剋隆新基因s-lap編碼區序列,研究其編碼的蛋白質在B16黑色素瘤細胞內的錶達與定位.方法分析s-lap cDNA序列,建立視網膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細胞光損傷模型,RT-PCR剋隆其編碼區序列,構建瞭帶有綠色熒光蛋白的目的基因真覈錶達重組質粒pcDNA3.1-GFP/s-lap,轉染B16黑色素瘤細胞,觀察s-lap/GFP融閤蛋白在B16黑色素瘤細胞內的錶達與定位.結果 s-lap cDNA序列含有編碼101箇氨基痠的開放讀碼框架,有2箇可能的N-糖基化位點,1箇可能的casein kinase II 燐痠化位點和2箇可能的 PKC燐痠化位點;成功地剋隆瞭s-lap蛋白編碼區序列,構建瞭其真覈錶達載體,熒光顯微鏡觀察,在轉染pcDNA3.1-GFP質粒的B16黑色素瘤細胞中,熒光呈網狀分佈于細胞漿內,而細胞覈內低錶達;在轉染s-lap/GFP融閤基因的B16黑色素瘤細胞中,熒光均勻分佈于整箇細胞,尤其以細胞覈內高錶達.結論新基因s-lap編碼的蛋白質可在B16黑色素瘤細胞中穫得錶達,併以細胞覈內高錶達.
목적극륭신기인s-lap편마구서렬,연구기편마적단백질재B16흑색소류세포내적표체여정위.방법분석s-lap cDNA서렬,건립시망막색소상피(retinal pigment epithelium,RPE)세포광손상모형,RT-PCR극륭기편마구서렬,구건료대유록색형광단백적목적기인진핵표체중조질립pcDNA3.1-GFP/s-lap,전염B16흑색소류세포,관찰s-lap/GFP융합단백재B16흑색소류세포내적표체여정위.결과 s-lap cDNA서렬함유편마101개안기산적개방독마광가,유2개가능적N-당기화위점,1개가능적casein kinase II 린산화위점화2개가능적 PKC린산화위점;성공지극륭료s-lap단백편마구서렬,구건료기진핵표체재체,형광현미경관찰,재전염pcDNA3.1-GFP질립적B16흑색소류세포중,형광정망상분포우세포장내,이세포핵내저표체;재전염s-lap/GFP융합기인적B16흑색소류세포중,형광균균분포우정개세포,우기이세포핵내고표체.결론신기인s-lap편마적단백질가재B16흑색소류세포중획득표체,병이세포핵내고표체.
