苏州大学学报（医学版）
囌州大學學報（醫學版）
소주대학학보（의학판）
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2005年
2期
182-185,219
,共5页
高凯%赵爱志%吴小兵%药力波%张英起%王军志
高凱%趙愛誌%吳小兵%藥力波%張英起%王軍誌
고개%조애지%오소병%약력파%장영기%왕군지
腺相关病毒%因治疗%瘤坏死因子%风湿关节炎
腺相關病毒%因治療%瘤壞死因子%風濕關節炎
선상관병독%인치료%류배사인자%풍습관절염
目的构建携带大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段融合基因的重组Ⅰ型腺相关病毒(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc),并对该病毒在Lewis大鼠体内的表达和生物学活性进行初步研究,探讨以该重组腺相关病毒载体应用于类风湿关节炎基因治疗的可行性.方法首先以RT-PCR分别从大鼠脾细胞和大鼠淋巴细胞总RNA中扩增出大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段基因,并以重叠延伸PCR的方法将二者融合后克隆入pSNAVⅠ载体质粒进行重组病毒生产.在获得重组病毒后于Lewis大鼠肌肉注射,于不同时间ELISA测定血清ratTNFR:Fc表达,并以TNF-α细胞毒中和实验测定重组病毒表达产物的生物学活性.结果所构建的重组病毒rAAVⅠ/ratTNFR:Fc基因结构与预期一致;病毒于Lewis大鼠肌肉注射后可表达ratTNFR:Fc蛋白,含有ratTNFR:Fc蛋白的血清可以有效中和大鼠TNF-α对L929细胞的杀伤作用.结论本研究所构建的携带大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段融合基因的重组Ⅰ型腺相关病毒(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc)可以用来作为阻断TNF-α的手段于大鼠类风湿关节炎模型上进行基因治疗研究.
目的構建攜帶大鼠腫瘤壞死因子Ⅱ型受體胞外區和大鼠免疫毬蛋白IgG1 Fc段融閤基因的重組Ⅰ型腺相關病毒(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc),併對該病毒在Lewis大鼠體內的錶達和生物學活性進行初步研究,探討以該重組腺相關病毒載體應用于類風濕關節炎基因治療的可行性.方法首先以RT-PCR分彆從大鼠脾細胞和大鼠淋巴細胞總RNA中擴增齣大鼠腫瘤壞死因子Ⅱ型受體胞外區和大鼠免疫毬蛋白IgG1 Fc段基因,併以重疊延伸PCR的方法將二者融閤後剋隆入pSNAVⅠ載體質粒進行重組病毒生產.在穫得重組病毒後于Lewis大鼠肌肉註射,于不同時間ELISA測定血清ratTNFR:Fc錶達,併以TNF-α細胞毒中和實驗測定重組病毒錶達產物的生物學活性.結果所構建的重組病毒rAAVⅠ/ratTNFR:Fc基因結構與預期一緻;病毒于Lewis大鼠肌肉註射後可錶達ratTNFR:Fc蛋白,含有ratTNFR:Fc蛋白的血清可以有效中和大鼠TNF-α對L929細胞的殺傷作用.結論本研究所構建的攜帶大鼠腫瘤壞死因子Ⅱ型受體胞外區和大鼠免疫毬蛋白IgG1 Fc段融閤基因的重組Ⅰ型腺相關病毒(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc)可以用來作為阻斷TNF-α的手段于大鼠類風濕關節炎模型上進行基因治療研究.
목적구건휴대대서종류배사인자Ⅱ형수체포외구화대서면역구단백IgG1 Fc단융합기인적중조Ⅰ형선상관병독(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc),병대해병독재Lewis대서체내적표체화생물학활성진행초보연구,탐토이해중조선상관병독재체응용우류풍습관절염기인치료적가행성.방법수선이RT-PCR분별종대서비세포화대서림파세포총RNA중확증출대서종류배사인자Ⅱ형수체포외구화대서면역구단백IgG1 Fc단기인,병이중첩연신PCR적방법장이자융합후극륭입pSNAVⅠ재체질립진행중조병독생산.재획득중조병독후우Lewis대서기육주사,우불동시간ELISA측정혈청ratTNFR:Fc표체,병이TNF-α세포독중화실험측정중조병독표체산물적생물학활성.결과소구건적중조병독rAAVⅠ/ratTNFR:Fc기인결구여예기일치;병독우Lewis대서기육주사후가표체ratTNFR:Fc단백,함유ratTNFR:Fc단백적혈청가이유효중화대서TNF-α대L929세포적살상작용.결론본연구소구건적휴대대서종류배사인자Ⅱ형수체포외구화대서면역구단백IgG1 Fc단융합기인적중조Ⅰ형선상관병독(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc)가이용래작위조단TNF-α적수단우대서류풍습관절염모형상진행기인치료연구.
