微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2006年
3期
445-450
,共6页
徐晶靓%江玲丽%陈宁%帅江冰%方维焕
徐晶靚%江玲麗%陳寧%帥江冰%方維煥
서정정%강령려%진저%수강빙%방유환
单核细胞增多性李斯特菌%同源重组%插入突变%李斯特菌溶血素O
單覈細胞增多性李斯特菌%同源重組%插入突變%李斯特菌溶血素O
단핵세포증다성리사특균%동원중조%삽입돌변%리사특균용혈소O
以鸡新城疫病毒F基因(NDV-F)为模式外源基因,通过基因切割-重叠延伸PCR法(SOE-PCR)将其插入到单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)毒力基因hly的启动子和信号肽序列下游,并将该融合片段克隆入穿梭质粒pKSV7,随后将重组质粒电转李斯特菌进行同源重组.NDV-F基因的PCR扩增表明该重组菌构建成功,RT-PCR结果表明F基因在重组菌中得到了转录.比较了重组菌和野生型菌株的溶血性、黏附和侵袭力、对小鼠和鸡胚的毒力和生长特性以及重组菌的体内外稳定性,结果表明:hly基因中F片段的整合消除了单核细胞增多性李斯特菌溶血素基因的表达, 其培养上清液没有溶血性, 而野生型菌株的溶血价达24;细胞试验表明重组菌对细胞的黏附力和相对侵袭力均有不同程度的降低,而相对侵袭力与野生型菌株具有显著性差异(P<0.05);重组菌对小鼠及鸡胚的毒力(LD50)与野生型相比分别下降3.7和6.5个对数数量级;重组菌在BHI肉汤和小鼠体内连续5次后,仍然可以扩增出目的基因NDV-F,初步表明该重组菌较为稳定.
以鷄新城疫病毒F基因(NDV-F)為模式外源基因,通過基因切割-重疊延伸PCR法(SOE-PCR)將其插入到單覈細胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)毒力基因hly的啟動子和信號肽序列下遊,併將該融閤片段剋隆入穿梭質粒pKSV7,隨後將重組質粒電轉李斯特菌進行同源重組.NDV-F基因的PCR擴增錶明該重組菌構建成功,RT-PCR結果錶明F基因在重組菌中得到瞭轉錄.比較瞭重組菌和野生型菌株的溶血性、黏附和侵襲力、對小鼠和鷄胚的毒力和生長特性以及重組菌的體內外穩定性,結果錶明:hly基因中F片段的整閤消除瞭單覈細胞增多性李斯特菌溶血素基因的錶達, 其培養上清液沒有溶血性, 而野生型菌株的溶血價達24;細胞試驗錶明重組菌對細胞的黏附力和相對侵襲力均有不同程度的降低,而相對侵襲力與野生型菌株具有顯著性差異(P<0.05);重組菌對小鼠及鷄胚的毒力(LD50)與野生型相比分彆下降3.7和6.5箇對數數量級;重組菌在BHI肉湯和小鼠體內連續5次後,仍然可以擴增齣目的基因NDV-F,初步錶明該重組菌較為穩定.
이계신성역병독F기인(NDV-F)위모식외원기인,통과기인절할-중첩연신PCR법(SOE-PCR)장기삽입도단핵세포증다성리사특균(Listeria monocytogenes)독력기인hly적계동자화신호태서렬하유,병장해융합편단극륭입천사질립pKSV7,수후장중조질립전전리사특균진행동원중조.NDV-F기인적PCR확증표명해중조균구건성공,RT-PCR결과표명F기인재중조균중득도료전록.비교료중조균화야생형균주적용혈성、점부화침습력、대소서화계배적독력화생장특성이급중조균적체내외은정성,결과표명:hly기인중F편단적정합소제료단핵세포증다성리사특균용혈소기인적표체, 기배양상청액몰유용혈성, 이야생형균주적용혈개체24;세포시험표명중조균대세포적점부력화상대침습력균유불동정도적강저,이상대침습력여야생형균주구유현저성차이(P<0.05);중조균대소서급계배적독력(LD50)여야생형상비분별하강3.7화6.5개대수수량급;중조균재BHI육탕화소서체내련속5차후,잉연가이확증출목적기인NDV-F,초보표명해중조균교위은정.
