生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
8期
1333-1339
,共7页
王红胜%李小青%何玉文%谢白露%唐雯莹%杜军
王紅勝%李小青%何玉文%謝白露%唐雯瑩%杜軍
왕홍성%리소청%하옥문%사백로%당문형%두군
微链载体%GFP%基因治疗
微鏈載體%GFP%基因治療
미련재체%GFP%기인치료
基因载体的转染、表达效率低和存在安全问题是基因治疗的难点.由于传统病毒及质粒载体含有大量外源基因,其表达有可能引发较严重免疫副反应.本课题旨在新的设计思路上开发高效安全基因治疗载体. 微链载体利用设计好的Cap序列封闭基因表达框两端,起到防止细胞内核酸外切酶降解的作用.从pEGFP-N3质粒中分离纯化得到GFP基因作为微链载体的报告基因.将微链载体与原质粒载体(pEGFP-N3质粒)分别转染入真核细胞,利用荧光显微镜和流式细胞仪检测并比较其转染效率.结果显示微链载体在293、CNE2、3T3、B95-8等真核细胞中的转染、表达效率较高,并具有较小的细胞毒性.初步证实了微链载体在真核细胞中转染、表达效率及安全性等方面具有一定的优越性.
基因載體的轉染、錶達效率低和存在安全問題是基因治療的難點.由于傳統病毒及質粒載體含有大量外源基因,其錶達有可能引髮較嚴重免疫副反應.本課題旨在新的設計思路上開髮高效安全基因治療載體. 微鏈載體利用設計好的Cap序列封閉基因錶達框兩耑,起到防止細胞內覈痠外切酶降解的作用.從pEGFP-N3質粒中分離純化得到GFP基因作為微鏈載體的報告基因.將微鏈載體與原質粒載體(pEGFP-N3質粒)分彆轉染入真覈細胞,利用熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測併比較其轉染效率.結果顯示微鏈載體在293、CNE2、3T3、B95-8等真覈細胞中的轉染、錶達效率較高,併具有較小的細胞毒性.初步證實瞭微鏈載體在真覈細胞中轉染、錶達效率及安全性等方麵具有一定的優越性.
기인재체적전염、표체효솔저화존재안전문제시기인치료적난점.유우전통병독급질립재체함유대량외원기인,기표체유가능인발교엄중면역부반응.본과제지재신적설계사로상개발고효안전기인치료재체. 미련재체이용설계호적Cap서렬봉폐기인표체광량단,기도방지세포내핵산외절매강해적작용.종pEGFP-N3질립중분리순화득도GFP기인작위미련재체적보고기인.장미련재체여원질립재체(pEGFP-N3질립)분별전염입진핵세포,이용형광현미경화류식세포의검측병비교기전염효솔.결과현시미련재체재293、CNE2、3T3、B95-8등진핵세포중적전염、표체효솔교고,병구유교소적세포독성.초보증실료미련재체재진핵세포중전염、표체효솔급안전성등방면구유일정적우월성.
