菌物学报
菌物學報
균물학보
MYCOSYSTEMA
2008年
5期
718-726
,共9页
曲广林%李仕贵%徐正君%王玉平%黄文娟%林瑜凡%万佳%马炳田
麯廣林%李仕貴%徐正君%王玉平%黃文娟%林瑜凡%萬佳%馬炳田
곡엄림%리사귀%서정군%왕옥평%황문연%림유범%만가%마병전
信号传导%开放阅读框%原核表达
信號傳導%開放閱讀框%原覈錶達
신호전도%개방열독광%원핵표체
由立枯丝核菌Rhizoctonia solani引起的水稻纹枯病(rice sheath blight)是水稻三大病害之一.G蛋白β亚基(G-protein beta-subunit)编码的蛋白作为重要的信号传导蛋白,在其致病分子机制中起着重要作用.为了解G蛋白β亚基基因的作用方式,本文根据同源物种G蛋白β亚基相关序列设计引物,通过PCR(polymerase chain reaction)和RT-PCR(reverse transcriptase PCR)技术,获得了以水稻为寄主的立枯丝核菌G蛋白β亚基(G-protein beta-subunit of rice Rhizoctonia solani,简写gbrrs1)的基因序列和开放阅读框ORF(open reading frame)(GenBank登录号EU267677).该基因全长1867bp,含有4个内含子和5个外显子,各内含子长度在54bp-65bp,且序列均符合5'-gt……ag-3,模式.开放阅读框1047bp,编码348aa,推测的蛋白质分子量为38.23kDa,等电点为6.54.该蛋白质具有2个alpha-helix和7个beta sheet的二级结构,每个beta sheet又包含4个beta-strand.gbrrs1在N端有2个alpha-helix,紧接着是由7个beta sheet由无规则卷曲连接形成的桶形结构.GenBank Blast结果表明,gbrrsl与四种真菌生物G蛋白β亚基的氨基酸序列同源性较高,与Lentinula edodes(AAT74567.1)、Coprinopsis cinema(EAU92269)、Ustilago maydis(AAN33051)和Filobasidiella neoformans(AAD03596)的一致性分别达到了89%、88%、81%和81%.将gbrss1的开放阅读框克隆于原核融合表达载体pGEX-4T-2中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得了相应蛋白的表达.
由立枯絲覈菌Rhizoctonia solani引起的水稻紋枯病(rice sheath blight)是水稻三大病害之一.G蛋白β亞基(G-protein beta-subunit)編碼的蛋白作為重要的信號傳導蛋白,在其緻病分子機製中起著重要作用.為瞭解G蛋白β亞基基因的作用方式,本文根據同源物種G蛋白β亞基相關序列設計引物,通過PCR(polymerase chain reaction)和RT-PCR(reverse transcriptase PCR)技術,穫得瞭以水稻為寄主的立枯絲覈菌G蛋白β亞基(G-protein beta-subunit of rice Rhizoctonia solani,簡寫gbrrs1)的基因序列和開放閱讀框ORF(open reading frame)(GenBank登錄號EU267677).該基因全長1867bp,含有4箇內含子和5箇外顯子,各內含子長度在54bp-65bp,且序列均符閤5'-gt……ag-3,模式.開放閱讀框1047bp,編碼348aa,推測的蛋白質分子量為38.23kDa,等電點為6.54.該蛋白質具有2箇alpha-helix和7箇beta sheet的二級結構,每箇beta sheet又包含4箇beta-strand.gbrrs1在N耑有2箇alpha-helix,緊接著是由7箇beta sheet由無規則捲麯連接形成的桶形結構.GenBank Blast結果錶明,gbrrsl與四種真菌生物G蛋白β亞基的氨基痠序列同源性較高,與Lentinula edodes(AAT74567.1)、Coprinopsis cinema(EAU92269)、Ustilago maydis(AAN33051)和Filobasidiella neoformans(AAD03596)的一緻性分彆達到瞭89%、88%、81%和81%.將gbrss1的開放閱讀框剋隆于原覈融閤錶達載體pGEX-4T-2中,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導,穫得瞭相應蛋白的錶達.
유립고사핵균Rhizoctonia solani인기적수도문고병(rice sheath blight)시수도삼대병해지일.G단백β아기(G-protein beta-subunit)편마적단백작위중요적신호전도단백,재기치병분자궤제중기착중요작용.위료해G단백β아기기인적작용방식,본문근거동원물충G단백β아기상관서렬설계인물,통과PCR(polymerase chain reaction)화RT-PCR(reverse transcriptase PCR)기술,획득료이수도위기주적립고사핵균G단백β아기(G-protein beta-subunit of rice Rhizoctonia solani,간사gbrrs1)적기인서렬화개방열독광ORF(open reading frame)(GenBank등록호EU267677).해기인전장1867bp,함유4개내함자화5개외현자,각내함자장도재54bp-65bp,차서렬균부합5'-gt……ag-3,모식.개방열독광1047bp,편마348aa,추측적단백질분자량위38.23kDa,등전점위6.54.해단백질구유2개alpha-helix화7개beta sheet적이급결구,매개beta sheet우포함4개beta-strand.gbrrs1재N단유2개alpha-helix,긴접착시유7개beta sheet유무규칙권곡련접형성적통형결구.GenBank Blast결과표명,gbrrsl여사충진균생물G단백β아기적안기산서렬동원성교고,여Lentinula edodes(AAT74567.1)、Coprinopsis cinema(EAU92269)、Ustilago maydis(AAN33051)화Filobasidiella neoformans(AAD03596)적일치성분별체도료89%、88%、81%화81%.장gbrss1적개방열독광극륭우원핵융합표체재체pGEX-4T-2중,경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도,획득료상응단백적표체.
