中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2011年
11期
31-34
,共4页
李晓叶%刘颖%蓝田丰%艾纯旭%陈健%袁宝%刘殿峰%任文陟
李曉葉%劉穎%藍田豐%艾純旭%陳健%袁寶%劉殿峰%任文陟
리효협%류영%람전봉%애순욱%진건%원보%류전봉%임문척
犬Ⅰ型腺病毒%杂交瘤%单克隆抗体%酶联免疫法:鉴定
犬Ⅰ型腺病毒%雜交瘤%單剋隆抗體%酶聯免疫法:鑒定
견Ⅰ형선병독%잡교류%단극륭항체%매련면역법:감정
为制备抗犬Ⅰ型腺病毒单克隆抗体,将犬Ⅰ型腺病毒(CAV-Ⅰ)细胞培养液饱和硫酸铵沉淀,差速离心浓缩,氯化铯密度梯度离心的方法纯化后免疫BALB/c小鼠,三免后效价过1:10000即可取脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇(PEG)作用下融合,通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,有限稀释法亚克隆,制备单克隆抗体,并对制备完成的单克隆抗体进行生物学特性鉴定.获得2株能稳定分泌抗CAV-I的单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为C8、E9,经鉴定其亚型分别为IgG1和IgG2a.间接ELISA检测效价,2株单抗细胞上清液效价为1:3200～1:6400,腹水效价为1:25600 ～1:51200.该单克隆抗体与CDV、FPV、FCV病毒均无交叉反应.实验成功制备了抗CAV-Ⅰ单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础.
為製備抗犬Ⅰ型腺病毒單剋隆抗體,將犬Ⅰ型腺病毒(CAV-Ⅰ)細胞培養液飽和硫痠銨沉澱,差速離心濃縮,氯化銫密度梯度離心的方法純化後免疫BALB/c小鼠,三免後效價過1:10000即可取脾細胞與SP2/0細胞在聚乙二醇(PEG)作用下融閤,通過間接ELISA方法篩選暘性雜交瘤細胞株,有限稀釋法亞剋隆,製備單剋隆抗體,併對製備完成的單剋隆抗體進行生物學特性鑒定.穫得2株能穩定分泌抗CAV-I的單剋隆抗體雜交瘤細胞,命名為C8、E9,經鑒定其亞型分彆為IgG1和IgG2a.間接ELISA檢測效價,2株單抗細胞上清液效價為1:3200～1:6400,腹水效價為1:25600 ～1:51200.該單剋隆抗體與CDV、FPV、FCV病毒均無交扠反應.實驗成功製備瞭抗CAV-Ⅰ單剋隆抗體,為進一步建立相關診斷方法奠定瞭基礎.
위제비항견Ⅰ형선병독단극륭항체,장견Ⅰ형선병독(CAV-Ⅰ)세포배양액포화류산안침정,차속리심농축,록화색밀도제도리심적방법순화후면역BALB/c소서,삼면후효개과1:10000즉가취비세포여SP2/0세포재취을이순(PEG)작용하융합,통과간접ELISA방법사선양성잡교류세포주,유한희석법아극륭,제비단극륭항체,병대제비완성적단극륭항체진행생물학특성감정.획득2주능은정분비항CAV-I적단극륭항체잡교류세포,명명위C8、E9,경감정기아형분별위IgG1화IgG2a.간접ELISA검측효개,2주단항세포상청액효개위1:3200～1:6400,복수효개위1:25600 ～1:51200.해단극륭항체여CDV、FPV、FCV병독균무교차반응.실험성공제비료항CAV-Ⅰ단극륭항체,위진일보건립상관진단방법전정료기출.
