中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2005年
6期
40-44
,共5页
刘立颖%许士奇%赵雪梅%杜洪震%张伟%梁平
劉立穎%許士奇%趙雪梅%杜洪震%張偉%樑平
류립영%허사기%조설매%두홍진%장위%량평
Aβ%融合抗体%毕赤酵母%Fc段
Aβ%融閤抗體%畢赤酵母%Fc段
Aβ%융합항체%필적효모%Fc단
抗β-淀粉样多肽(Aβ)的抗体对老年性痴呆(AD)病变有清除作用,人源融合抗体由可识别结合Aβ的多肽序列A与人抗体Fc段连接重组构成.构建的单拷贝表达载体PAO815-αAFc,可以在毕赤酵母中高效表达.此表达载体含有一个AFc表达单元,并在受严格调控的醇氧化酶启动子的控制下由甲醇诱导表达,并利用α因子前导肽引导融合抗体分泌.载体线性化后整合入甲醇营养型酵母Pichia pastoris(Pp)GS115基因组中,经鉴定表达单位具有良好的遗传稳定性.对筛选得到的高分泌表达融合抗体的细胞株进行表达和培养条件的优化,使诱导上清液中融合抗体的产量达到100mg/L.利用Protein A层析柱分离、纯化,获得纯度较高的融合抗体.经鉴定分析其具有正确的分子量和N末端,且融合抗体可与Aβ抗原结合并能吸引巨噬细胞吞噬和清除抗原抗体复合物,具有抗体生物学活性.这是首次利用甲醇营养型酵母表达系统成功实现了抗Aβ融合抗体的高效分泌表达及产物纯化鉴定,为进一步研究AD及其治疗提供了新的途径.
抗β-澱粉樣多肽(Aβ)的抗體對老年性癡呆(AD)病變有清除作用,人源融閤抗體由可識彆結閤Aβ的多肽序列A與人抗體Fc段連接重組構成.構建的單拷貝錶達載體PAO815-αAFc,可以在畢赤酵母中高效錶達.此錶達載體含有一箇AFc錶達單元,併在受嚴格調控的醇氧化酶啟動子的控製下由甲醇誘導錶達,併利用α因子前導肽引導融閤抗體分泌.載體線性化後整閤入甲醇營養型酵母Pichia pastoris(Pp)GS115基因組中,經鑒定錶達單位具有良好的遺傳穩定性.對篩選得到的高分泌錶達融閤抗體的細胞株進行錶達和培養條件的優化,使誘導上清液中融閤抗體的產量達到100mg/L.利用Protein A層析柱分離、純化,穫得純度較高的融閤抗體.經鑒定分析其具有正確的分子量和N末耑,且融閤抗體可與Aβ抗原結閤併能吸引巨噬細胞吞噬和清除抗原抗體複閤物,具有抗體生物學活性.這是首次利用甲醇營養型酵母錶達繫統成功實現瞭抗Aβ融閤抗體的高效分泌錶達及產物純化鑒定,為進一步研究AD及其治療提供瞭新的途徑.
항β-정분양다태(Aβ)적항체대노년성치태(AD)병변유청제작용,인원융합항체유가식별결합Aβ적다태서렬A여인항체Fc단련접중조구성.구건적단고패표체재체PAO815-αAFc,가이재필적효모중고효표체.차표체재체함유일개AFc표체단원,병재수엄격조공적순양화매계동자적공제하유갑순유도표체,병이용α인자전도태인도융합항체분비.재체선성화후정합입갑순영양형효모Pichia pastoris(Pp)GS115기인조중,경감정표체단위구유량호적유전은정성.대사선득도적고분비표체융합항체적세포주진행표체화배양조건적우화,사유도상청액중융합항체적산량체도100mg/L.이용Protein A층석주분리、순화,획득순도교고적융합항체.경감정분석기구유정학적분자량화N말단,차융합항체가여Aβ항원결합병능흡인거서세포탄서화청제항원항체복합물,구유항체생물학활성.저시수차이용갑순영양형효모표체계통성공실현료항Aβ융합항체적고효분비표체급산물순화감정,위진일보연구AD급기치료제공료신적도경.
