科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2007年
14期
3373-3377
,共5页
任君萍%高淑娴%张伟%雷迎峰%丁天兵%宋建华%马文煜
任君萍%高淑嫻%張偉%雷迎峰%丁天兵%宋建華%馬文煜
임군평%고숙한%장위%뢰영봉%정천병%송건화%마문욱
日本脑炎病毒%克隆%表达%纯化
日本腦炎病毒%剋隆%錶達%純化
일본뇌염병독%극륭%표체%순화
克隆表达JEV E蛋白Ⅲ区基因,序列测定正确后进行融合表达、纯化.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从JEV cDNA中扩增Ⅲ区基因,用限制性内切酶消化后插入到PMD-18T载体,序列测定正确后,再亚克隆到融合表达载体pET32a中.转化大肠杆菌BL21(DE3),目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的JEV E Ⅲ区蛋白.在变性条件下对目的蛋白进行纯化,获得了融合6个组氨酸残基的JEV E Ⅲ区蛋白,蛋白纯度大于80%.证实构建了JEV E Ⅲ基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.
剋隆錶達JEV E蛋白Ⅲ區基因,序列測定正確後進行融閤錶達、純化.採用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)從JEV cDNA中擴增Ⅲ區基因,用限製性內切酶消化後插入到PMD-18T載體,序列測定正確後,再亞剋隆到融閤錶達載體pET32a中.轉化大腸桿菌BL21(DE3),目的基因經IPTG誘導,由T7啟動子調控錶達瞭氨基耑帶6箇連續組氨痠殘基的JEV E Ⅲ區蛋白.在變性條件下對目的蛋白進行純化,穫得瞭融閤6箇組氨痠殘基的JEV E Ⅲ區蛋白,蛋白純度大于80%.證實構建瞭JEV E Ⅲ基因的重組錶達載體,併穫得瞭高純度的融閤錶達蛋白,為以後的深入研究奠定瞭基礎.
극륭표체JEV E단백Ⅲ구기인,서렬측정정학후진행융합표체、순화.채용역전록취합매련반응(RT-PCR)종JEV cDNA중확증Ⅲ구기인,용한제성내절매소화후삽입도PMD-18T재체,서렬측정정학후,재아극륭도융합표체재체pET32a중.전화대장간균BL21(DE3),목적기인경IPTG유도,유T7계동자조공표체료안기단대6개련속조안산잔기적JEV E Ⅲ구단백.재변성조건하대목적단백진행순화,획득료융합6개조안산잔기적JEV E Ⅲ구단백,단백순도대우80%.증실구건료JEV E Ⅲ기인적중조표체재체,병획득료고순도적융합표체단백,위이후적심입연구전정료기출.
