兔骨髓间充质干细胞经Ad-TGFβ1重组腺病毒载体转染定向分化为软骨细胞
토골수간충질간세포경Ad-TGFβ1중조선병독재체전염정향분화위연골세포
Rabbit mesenchymal stem cells differentiate into chondrocytes by transfection of Ad-TGFβ1 recombinant adenovirus vector
  • 万方数据
    中国组织工程研究与临床康复 중국조직공정연구여림상강복
    JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
    2007年 42期 8444-8448 ,共5页

    秦宏敏%沙广钊%佟向阳%许铁%冯斌%刘凯%陈孜%姚爱明%张轶%刘林%谢春雷

    진굉민%사엄쇠%동향양%허철%풍빈%류개%진자%요애명%장질%류림%사춘뢰

    骨髓间充质干细胞%转化生长因子β1%转染%软骨细胞 骨髓間充質榦細胞%轉化生長因子β1%轉染%軟骨細胞
    골수간충질간세포%전화생장인자β1%전염%연골세포
    目的:通过软骨组织工程与基因治疗相结合的技术,利用腺病毒载体将转化生长因子β1基因导入兔骨髓间充质干细胞,使其诱导靶细胞定向分化为软骨细胞.方法:实验于2004-03/2006-03在徐州医学院完成.①实验方法:兔麻醉后自胫骨上端抽取骨髓,体外分离培养骨髓间充质干细胞.取第2代细胞,以1×104/cm2接种,达70%融合时分为3组:Ad-TGFβ1转染组采用H-DMEM无血清培养基,加入刚解冻的Ad-TGFβ1液30 μL,地塞米松100 nmol/L,维生素C 50 mg/L;Ad-GFP对照组采用H-DMEM无血清培养基,加入Ad-GFP腺病毒,地塞米松100 nmol/L,维生素C 50 mg/L;空白对照组采用H-DMEM完全培养基,不外加任何试剂或药品.②实验评估:倒置显微镜逐日观察细胞生长情况.分别于转染后7,14,21,28 d检测细胞内蛋白多糖、转化生长因子β1、Ⅱ型胶原的表达.结果:①细胞形态学观察:Ad-TGFβ1转染后7 d,集落中的细胞呈放射状向周围扩展,均一性好,呈长梭形,紧密排列似漩涡状,生长速度明显增快,细胞密度明显增高.②转染后细胞内蛋白多糖的检测:Ad-TGFβ1转染后14 d胞浆呈紫蓝色,异染性明显,胞核清晰,可见核仁.转染后28 d细胞明显老化,但胞浆中仍可见紫蓝色异染.其余两组均未见明显的异染性.③转染后转化生长因子β1的表达:Ad-TGFβ1转染组细胞中转化生长因子β1呈强阳性表达,其余两组几乎检测不到转化生长因子B1的表达.④转染后细胞内Ⅱ型胶原的表达:Ad-TGFβ1转染后7 d胞浆中Ⅱ型胶原呈弱阳性表达,转染后14,21 d呈强阳性表达,转染后28 d表达有所降低.其余两组几乎不表达Ⅱ型胶原.结论:经Ad-TGFβ1重组腺病毒载体转染,兔骨髓间充质干细胞可定向分化为软骨细胞,是获得软骨组织工程种子细胞的方法之一.
    목적:통과연골조직공정여기인치료상결합적기술,이용선병독재체장전화생장인자β1기인도입토골수간충질간세포,사기유도파세포정향분화위연골세포.방법:실험우2004-03/2006-03재서주의학원완성.①실험방법:토마취후자경골상단추취골수,체외분리배양골수간충질간세포.취제2대세포,이1×104/cm2접충,체70%융합시분위3조:Ad-TGFβ1전염조채용H-DMEM무혈청배양기,가입강해동적Ad-TGFβ1액30 μL,지새미송100 nmol/L,유생소C 50 mg/L;Ad-GFP대조조채용H-DMEM무혈청배양기,가입Ad-GFP선병독,지새미송100 nmol/L,유생소C 50 mg/L;공백대조조채용H-DMEM완전배양기,불외가임하시제혹약품.②실험평고:도치현미경축일관찰세포생장정황.분별우전염후7,14,21,28 d검측세포내단백다당、전화생장인자β1、Ⅱ형효원적표체.결과:①세포형태학관찰:Ad-TGFβ1전염후7 d,집락중적세포정방사상향주위확전,균일성호,정장사형,긴밀배렬사선와상,생장속도명현증쾌,세포밀도명현증고.②전염후세포내단백다당적검측:Ad-TGFβ1전염후14 d포장정자람색,이염성명현,포핵청석,가견핵인.전염후28 d세포명현노화,단포장중잉가견자람색이염.기여량조균미견명현적이염성.③전염후전화생장인자β1적표체:Ad-TGFβ1전염조세포중전화생장인자β1정강양성표체,기여량조궤호검측불도전화생장인자B1적표체.④전염후세포내Ⅱ형효원적표체:Ad-TGFβ1전염후7 d포장중Ⅱ형효원정약양성표체,전염후14,21 d정강양성표체,전염후28 d표체유소강저.기여량조궤호불표체Ⅱ형효원.결론:경Ad-TGFβ1중조선병독재체전염,토골수간충질간세포가정향분화위연골세포,시획득연골조직공정충자세포적방법지일.
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