在基于BAC的EB病毒基因组中引入突变
재기우BAC적EB병독기인조중인입돌변
Gene modification in the genome of Epstein-Barr virus cloned as a bacterial artificial chromosome
  • 万方数据
    微生物学报 미생물학보
    ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
    2008年 3期 385-390 ,共6页

    卢建红%唐运莲%周鸣%武明花%欧阳珏%高建明%张荔茗%李丹%陈琼%熊炜%李小玲%唐珂%李桂源

    로건홍%당운련%주명%무명화%구양각%고건명%장려명%리단%진경%웅위%리소령%당가%리계원

    EB病毒%突变%同源重组%线性转化 EB病毒%突變%同源重組%線性轉化
    EB병독%돌변%동원중조%선성전화
    为了在Epstein-Barr病毒(EBV)172kb的基因组中引入突变以研究基因功能,建立了一种简单有效的基因操作方法.在载体pcDNA3.1(+)上操作,将两端含有重组蛋白FLP识别位点(FRT)的卡那霉素筛选标记基因(kan)与鼻咽癌(NPC)来源的、包含LMP1基因全长ORF的gDNA"无缝"连接(无外源序列插入).连接后的kan-LMP1线性DNA片段经转化、由λ噬菌体中redαβγ系统介导在E.coli中发生同源重组(ET克隆),用kan-LMP1替代了BAC-EBV(p2089)中相应的LMP1基因区域,然后经过重组蛋白FLP对FRT-kan-FRT特异性的识别,切除了引入的kan基因,留下一个69bp的FRT"疤痕".通过抗性筛选和对菌液进行PCR扩增可以鉴定突变子.这种经改进并程序化的方法.也适应于引入其它突变或在其它BAC-疱疹病毒基因组中引入突变.
    위료재Epstein-Barr병독(EBV)172kb적기인조중인입돌변이연구기인공능,건립료일충간단유효적기인조작방법.재재체pcDNA3.1(+)상조작,장량단함유중조단백FLP식별위점(FRT)적잡나매소사선표기기인(kan)여비인암(NPC)래원적、포함LMP1기인전장ORF적gDNA"무봉"련접(무외원서렬삽입).련접후적kan-LMP1선성DNA편단경전화、유λ서균체중redαβγ계통개도재E.coli중발생동원중조(ET극륭),용kan-LMP1체대료BAC-EBV(p2089)중상응적LMP1기인구역,연후경과중조단백FLP대FRT-kan-FRT특이성적식별,절제료인입적kan기인,류하일개69bp적FRT"파흔".통과항성사선화대균액진행PCR확증가이감정돌변자.저충경개진병정서화적방법.야괄응우인입기타돌변혹재기타BAC-포진병독기인조중인입돌변.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문