浙江大学学报(医学版)
浙江大學學報(醫學版)
절강대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2009年
2期
117-124
,共8页
钱韵%姚航平%程林芳%沈玲%古丽娟%陶岚%张立煌
錢韻%姚航平%程林芳%瀋玲%古麗娟%陶嵐%張立煌
전운%요항평%정림방%침령%고려연%도람%장립황
遗传载体%重组蛋白质类%mB7-H4%重组%表达%免疫抑制
遺傳載體%重組蛋白質類%mB7-H4%重組%錶達%免疫抑製
유전재체%중조단백질류%mB7-H4%중조%표체%면역억제
目的:构建小鼠B7-H4胞外区基因的真核表达载体,转染酵母细胞以表达mB7-H4,并检测其生物学活性.方法:以mB7-H4的重组质粒为模板,在克隆引物上加入Xho I和EcoR I酶切位点,并用PCR方法扩增得到mB7-H4胞外区的基因片段,经Xho I和EcoR I双酶切后接入酵母表达载体Ppic9上,构建成Ppic9-mB7-H4重组质粒.经双酶切和核酸测序鉴定,将该重组质粒转染至酵母细胞,用PCR、Western Blot及ELISA等方法检测重组基因的表达,并鉴定表达蛋白的生物学活性.结果:转染Ppic9-mB7-H4重组质粒的酵母细胞内表达mB7-H4,诱导表达的mB7-H4能有效抑制CD3单抗活化的T淋巴细胞的增殖(相对抑制率为28.3%)和IL-2(相对抑制率为68.8%)、IL-4(相对抑制率为78.8%)、IL-10(相对抑制率为67.6%)、IFN-γ(相对抑制率为77.7%)等细胞因子的分泌.结论:成功构建了mB7-H4真核表达系统,并获得了有生物学活性的mB7-H4分子.
目的:構建小鼠B7-H4胞外區基因的真覈錶達載體,轉染酵母細胞以錶達mB7-H4,併檢測其生物學活性.方法:以mB7-H4的重組質粒為模闆,在剋隆引物上加入Xho I和EcoR I酶切位點,併用PCR方法擴增得到mB7-H4胞外區的基因片段,經Xho I和EcoR I雙酶切後接入酵母錶達載體Ppic9上,構建成Ppic9-mB7-H4重組質粒.經雙酶切和覈痠測序鑒定,將該重組質粒轉染至酵母細胞,用PCR、Western Blot及ELISA等方法檢測重組基因的錶達,併鑒定錶達蛋白的生物學活性.結果:轉染Ppic9-mB7-H4重組質粒的酵母細胞內錶達mB7-H4,誘導錶達的mB7-H4能有效抑製CD3單抗活化的T淋巴細胞的增殖(相對抑製率為28.3%)和IL-2(相對抑製率為68.8%)、IL-4(相對抑製率為78.8%)、IL-10(相對抑製率為67.6%)、IFN-γ(相對抑製率為77.7%)等細胞因子的分泌.結論:成功構建瞭mB7-H4真覈錶達繫統,併穫得瞭有生物學活性的mB7-H4分子.
목적:구건소서B7-H4포외구기인적진핵표체재체,전염효모세포이표체mB7-H4,병검측기생물학활성.방법:이mB7-H4적중조질립위모판,재극륭인물상가입Xho I화EcoR I매절위점,병용PCR방법확증득도mB7-H4포외구적기인편단,경Xho I화EcoR I쌍매절후접입효모표체재체Ppic9상,구건성Ppic9-mB7-H4중조질립.경쌍매절화핵산측서감정,장해중조질립전염지효모세포,용PCR、Western Blot급ELISA등방법검측중조기인적표체,병감정표체단백적생물학활성.결과:전염Ppic9-mB7-H4중조질립적효모세포내표체mB7-H4,유도표체적mB7-H4능유효억제CD3단항활화적T림파세포적증식(상대억제솔위28.3%)화IL-2(상대억제솔위68.8%)、IL-4(상대억제솔위78.8%)、IL-10(상대억제솔위67.6%)、IFN-γ(상대억제솔위77.7%)등세포인자적분비.결론:성공구건료mB7-H4진핵표체계통,병획득료유생물학활성적mB7-H4분자.
