食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2009年
9期
168-171
,共4页
康壮丽%郝凤霞%胡文革%赵建朋
康壯麗%郝鳳霞%鬍文革%趙建朋
강장려%학봉하%호문혁%조건붕
中度嗜盐菌%α-淀粉酶%克隆%表达
中度嗜鹽菌%α-澱粉酶%剋隆%錶達
중도기염균%α-정분매%극륭%표체
本实验室从新疆盐湖分离得到一株产α-淀粉酶中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05,根据已报道的α-淀粉酶基因(α-AMY)序列的保守区域设计引物,从中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05基因组中扩增出α-淀粉酶基因片段,将α-淀粉酶基因纯化后克隆到pGM-T载体上测序,结果表明α-淀粉酶基因片段长约1500bp,与地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的α-淀粉酶基因序列的同源性为95%,两种序列具有一定的同源性.按正确的阅读框架将α-淀粉酶基因片段定向克隆到表达载体pET-32a上,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,α-淀粉酶基因能在大肠杆菌BL21中成功表达,确定表达蛋白的相对分子量为61kD左右,与理论推导的分子量相一致;构建的大肠杆菌工程菌,所产生的α-淀粉酶是包涵体,通过超声波粉碎仪粉碎后,测α-淀粉酶酶活为原菌的1.8倍.
本實驗室從新疆鹽湖分離得到一株產α-澱粉酶中度嗜鹽菌Bacillus sp.XJ1-05,根據已報道的α-澱粉酶基因(α-AMY)序列的保守區域設計引物,從中度嗜鹽菌Bacillus sp.XJ1-05基因組中擴增齣α-澱粉酶基因片段,將α-澱粉酶基因純化後剋隆到pGM-T載體上測序,結果錶明α-澱粉酶基因片段長約1500bp,與地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis的α-澱粉酶基因序列的同源性為95%,兩種序列具有一定的同源性.按正確的閱讀框架將α-澱粉酶基因片段定嚮剋隆到錶達載體pET-32a上,將重組質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)菌株,經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE電泳錶明,α-澱粉酶基因能在大腸桿菌BL21中成功錶達,確定錶達蛋白的相對分子量為61kD左右,與理論推導的分子量相一緻;構建的大腸桿菌工程菌,所產生的α-澱粉酶是包涵體,通過超聲波粉碎儀粉碎後,測α-澱粉酶酶活為原菌的1.8倍.
본실험실종신강염호분리득도일주산α-정분매중도기염균Bacillus sp.XJ1-05,근거이보도적α-정분매기인(α-AMY)서렬적보수구역설계인물,종중도기염균Bacillus sp.XJ1-05기인조중확증출α-정분매기인편단,장α-정분매기인순화후극륭도pGM-T재체상측서,결과표명α-정분매기인편단장약1500bp,여지의아포간균Bacillus licheniformis적α-정분매기인서렬적동원성위95%,량충서렬구유일정적동원성.안정학적열독광가장α-정분매기인편단정향극륭도표체재체pET-32a상,장중조질립전화도대장간균BL21(DE3)균주,경IPTG유도표체,SDS-PAGE전영표명,α-정분매기인능재대장간균BL21중성공표체,학정표체단백적상대분자량위61kD좌우,여이론추도적분자량상일치;구건적대장간균공정균,소산생적α-정분매시포함체,통과초성파분쇄의분쇄후,측α-정분매매활위원균적1.8배.
