上海交通大学学报(医学版)
上海交通大學學報(醫學版)
상해교통대학학보(의학판)
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2010年
9期
1121-1124
,共4页
沈楠%余永胜%潘庆春%陈小华%臧国庆%汤正好
瀋楠%餘永勝%潘慶春%陳小華%臧國慶%湯正好
침남%여영성%반경춘%진소화%장국경%탕정호
乙型肝炎病毒核心抗原%DNA疫苗%泛素%融合基因
乙型肝炎病毒覈心抗原%DNA疫苗%汎素%融閤基因
을형간염병독핵심항원%DNA역묘%범소%융합기인
目的 构建乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)强制泛素(Ub)化的DNA疫苗表达质粒.方法 以BALB/c小鼠肝脏mRNA为模板,RT-PCR扩增Ub单体基因片段,并将其羧基端第76位氨基酸突变为丙氨酸;以HBV pADR为模板,PCR扩增HBcAg基因片段,并根据N末端法则将其第1位氨基酸突变为精氨酸;利用重组PCR技术拼接Ub-HBcAg融合基因,纯化后连接pUCm-T载体,酶切鉴定正确后将Ub-HBcAg片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(-),构建重组真核表达质粒Ub-HBcAg-pcDNA3.1(-),并行酶切鉴定和基因测序.结果 构建的HBcAg强制Ub化融合基因DNA疫苗经基因测序证实目的 基因插入方向正确,突变与预期相符;其余基因序列与GenBank发布序列完全一致.结论 成功构建了HBcAg强制Ub化融合基因DNA疫苗.
目的 構建乙型肝炎病毒覈心抗原(HBcAg)彊製汎素(Ub)化的DNA疫苗錶達質粒.方法 以BALB/c小鼠肝髒mRNA為模闆,RT-PCR擴增Ub單體基因片段,併將其羧基耑第76位氨基痠突變為丙氨痠;以HBV pADR為模闆,PCR擴增HBcAg基因片段,併根據N末耑法則將其第1位氨基痠突變為精氨痠;利用重組PCR技術拼接Ub-HBcAg融閤基因,純化後連接pUCm-T載體,酶切鑒定正確後將Ub-HBcAg片段插入真覈錶達質粒pcDNA3.1(-),構建重組真覈錶達質粒Ub-HBcAg-pcDNA3.1(-),併行酶切鑒定和基因測序.結果 構建的HBcAg彊製Ub化融閤基因DNA疫苗經基因測序證實目的 基因插入方嚮正確,突變與預期相符;其餘基因序列與GenBank髮佈序列完全一緻.結論 成功構建瞭HBcAg彊製Ub化融閤基因DNA疫苗.
목적 구건을형간염병독핵심항원(HBcAg)강제범소(Ub)화적DNA역묘표체질립.방법 이BALB/c소서간장mRNA위모판,RT-PCR확증Ub단체기인편단,병장기최기단제76위안기산돌변위병안산;이HBV pADR위모판,PCR확증HBcAg기인편단,병근거N말단법칙장기제1위안기산돌변위정안산;이용중조PCR기술병접Ub-HBcAg융합기인,순화후련접pUCm-T재체,매절감정정학후장Ub-HBcAg편단삽입진핵표체질립pcDNA3.1(-),구건중조진핵표체질립Ub-HBcAg-pcDNA3.1(-),병행매절감정화기인측서.결과 구건적HBcAg강제Ub화융합기인DNA역묘경기인측서증실목적 기인삽입방향정학,돌변여예기상부;기여기인서렬여GenBank발포서렬완전일치.결론 성공구건료HBcAg강제Ub화융합기인DNA역묘.
