医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
1期
1-6
,共6页
魏洪莲%张锦前%肖凡%李学永%成军%魏红山%展玉涛
魏洪蓮%張錦前%肖凡%李學永%成軍%魏紅山%展玉濤
위홍련%장금전%초범%리학영%성군%위홍산%전옥도
糖基因%糖基转移酶%脂肪肝%载脂蛋白%糖基化修饰
糖基因%糖基轉移酶%脂肪肝%載脂蛋白%糖基化脩飾
당기인%당기전이매%지방간%재지단백%당기화수식
目的 构建新糖基转移酶基因Glt8d2的原核表达载体,诱导融合蛋白的表达,并对其进行纯化;制备兔抗Glt8d2蛋白多克隆抗体并进行鉴定.方法 应用RT-PCR技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增Glt8d2目的基因片段,构建原核表达载体pET-32a(+)-Glt8d2.转化大肠埃希菌BL21,异丙基-D-半乳糖苷诱导并通过SDS-PAGE凝胶电泳分析、Western印迹分析、生物质谱分析证实Glt8d2重组蛋白表达正确.大量表达后利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗Glt8d2蛋白的多克隆抗体.以纯化的Glt8d2重组蛋白为抗原,分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体,利用Western印迹和酶联免疫吸附法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测.结果 扩增获得Glt8d2基因片段,成功表达了Glt8d2重组蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析得到证实.成功获得重组蛋白及兔抗Glt8d2多克隆抗体.ELISA检测证实多克隆抗体效价>l:320 000.免疫组织化学分析显示,该基因编码的糖基转移酶在肝实质细胞内呈胞质模式表达分布.结论 利用大肠埃希菌BL21能够成功表达Glt8d2重组蛋白,获得高特异性、高效价兔抗Glt8d2重组蛋白的多克隆抗体,为今后研究Glt8d2基因的生物学功能研究奠定了基础.
目的 構建新糖基轉移酶基因Glt8d2的原覈錶達載體,誘導融閤蛋白的錶達,併對其進行純化;製備兔抗Glt8d2蛋白多剋隆抗體併進行鑒定.方法 應用RT-PCR技術,以HepG2細胞mRNA為模闆,擴增Glt8d2目的基因片段,構建原覈錶達載體pET-32a(+)-Glt8d2.轉化大腸埃希菌BL21,異丙基-D-半乳糖苷誘導併通過SDS-PAGE凝膠電泳分析、Western印跡分析、生物質譜分析證實Glt8d2重組蛋白錶達正確.大量錶達後利用Ni+親和柱對錶達蛋白進行純化及柱上複性.純化蛋白免疫新西蘭大白兔,穫得抗Glt8d2蛋白的多剋隆抗體.以純化的Glt8d2重組蛋白為抗原,分彆以免疫前後的新西蘭兔血清作為第一抗體,利用Western印跡和酶聯免疫吸附法對多剋隆抗體進行特異性分析及效價檢測.結果 擴增穫得Glt8d2基因片段,成功錶達瞭Glt8d2重組蛋白,經SDS-PAGE凝膠電泳和Western印跡分析得到證實.成功穫得重組蛋白及兔抗Glt8d2多剋隆抗體.ELISA檢測證實多剋隆抗體效價>l:320 000.免疫組織化學分析顯示,該基因編碼的糖基轉移酶在肝實質細胞內呈胞質模式錶達分佈.結論 利用大腸埃希菌BL21能夠成功錶達Glt8d2重組蛋白,穫得高特異性、高效價兔抗Glt8d2重組蛋白的多剋隆抗體,為今後研究Glt8d2基因的生物學功能研究奠定瞭基礎.
목적 구건신당기전이매기인Glt8d2적원핵표체재체,유도융합단백적표체,병대기진행순화;제비토항Glt8d2단백다극륭항체병진행감정.방법 응용RT-PCR기술,이HepG2세포mRNA위모판,확증Glt8d2목적기인편단,구건원핵표체재체pET-32a(+)-Glt8d2.전화대장애희균BL21,이병기-D-반유당감유도병통과SDS-PAGE응효전영분석、Western인적분석、생물질보분석증실Glt8d2중조단백표체정학.대량표체후이용Ni+친화주대표체단백진행순화급주상복성.순화단백면역신서란대백토,획득항Glt8d2단백적다극륭항체.이순화적Glt8d2중조단백위항원,분별이면역전후적신서란토혈청작위제일항체,이용Western인적화매련면역흡부법대다극륭항체진행특이성분석급효개검측.결과 확증획득Glt8d2기인편단,성공표체료Glt8d2중조단백,경SDS-PAGE응효전영화Western인적분석득도증실.성공획득중조단백급토항Glt8d2다극륭항체.ELISA검측증실다극륭항체효개>l:320 000.면역조직화학분석현시,해기인편마적당기전이매재간실질세포내정포질모식표체분포.결론 이용대장애희균BL21능구성공표체Glt8d2중조단백,획득고특이성、고효개토항Glt8d2중조단백적다극륭항체,위금후연구Glt8d2기인적생물학공능연구전정료기출.
