畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
5期
742-746
,共5页
李凯%高宏雷%高立%祁小乐%高玉龙%徐延伟%王笑梅
李凱%高宏雷%高立%祁小樂%高玉龍%徐延偉%王笑梅
리개%고굉뢰%고립%기소악%고옥룡%서연위%왕소매
TaqMan荧光定量PCR%毕赤酵母%基因拷贝数%GAP基因
TaqMan熒光定量PCR%畢赤酵母%基因拷貝數%GAP基因
TaqMan형광정량PCR%필적효모%기인고패수%GAP기인
以3-磷酸甘油醛脱氢酶为内参基因,建立一种快速检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法.通过对反应参数进行优化,建立针对目的基因和内参基因的双标准曲线,并对重组酵母基因组中外源基因和内参基因的拷贝数进行同时定量检测,外源基因与内参基因起始模板拷贝数的比值即为外源基因在重组酵母菌株基因组中的拷贝数.结果表明,2条标准曲线在101～108拷贝·μL-1具有良好的线性关系,以及良好的敏感性和重复性.利用该方法对60株重组酵母菌株进行荧光定量PCR检测,结果筛选到38株单拷贝插入菌株和22株多拷贝插入菌株.本研究所建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法方便、高效,可用于重组毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的检测.
以3-燐痠甘油醛脫氫酶為內參基因,建立一種快速檢測畢赤酵母基因組中外源基因拷貝數的TaqMan熒光定量PCR方法.通過對反應參數進行優化,建立針對目的基因和內參基因的雙標準麯線,併對重組酵母基因組中外源基因和內參基因的拷貝數進行同時定量檢測,外源基因與內參基因起始模闆拷貝數的比值即為外源基因在重組酵母菌株基因組中的拷貝數.結果錶明,2條標準麯線在101～108拷貝·μL-1具有良好的線性關繫,以及良好的敏感性和重複性.利用該方法對60株重組酵母菌株進行熒光定量PCR檢測,結果篩選到38株單拷貝插入菌株和22株多拷貝插入菌株.本研究所建立的TaqMan探針熒光定量PCR方法方便、高效,可用于重組畢赤酵母基因組中外源基因拷貝數的檢測.
이3-린산감유철탈경매위내삼기인,건립일충쾌속검측필적효모기인조중외원기인고패수적TaqMan형광정량PCR방법.통과대반응삼수진행우화,건립침대목적기인화내삼기인적쌍표준곡선,병대중조효모기인조중외원기인화내삼기인적고패수진행동시정량검측,외원기인여내삼기인기시모판고패수적비치즉위외원기인재중조효모균주기인조중적고패수.결과표명,2조표준곡선재101～108고패·μL-1구유량호적선성관계,이급량호적민감성화중복성.이용해방법대60주중조효모균주진행형광정량PCR검측,결과사선도38주단고패삽입균주화22주다고패삽입균주.본연구소건립적TaqMan탐침형광정량PCR방법방편、고효,가용우중조필적효모기인조중외원기인고패수적검측.
