实用肝脏病杂志
實用肝髒病雜誌
실용간장병잡지
JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
2012年
3期
212-215
,共4页
彭梅娟%郝春秋%张野%谢玉梅%张岩%白雪帆
彭梅娟%郝春鞦%張野%謝玉梅%張巖%白雪帆
팽매연%학춘추%장야%사옥매%장암%백설범
HSC-T6细胞%结缔组织生长因子%慢病毒载体%RNA干扰
HSC-T6細胞%結締組織生長因子%慢病毒載體%RNA榦擾
HSC-T6세포%결체조직생장인자%만병독재체%RNA간우
目的 利用RNA干扰技术,以慢病毒为载体,介导结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默,并观察其对下游基因表达的影响.方法 用构建的CTGF小干扰RNA(siRNA)慢病毒转移质粒与包装质粒、包膜蛋白质粒共转染293T细胞,包装成介导CTGF基因沉默的慢病毒载体;感染肝星状细胞系HSC-T6,应用Real-time PCR和Western免疫印迹法筛选基因沉默效率最高的慢病毒载体;再根据绿色荧光蛋白(GFP)表达水平检测感染效率;应用Real-time PCR法检测CTGF基因沉默后HSC-T6中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2和Ⅰ型胶原mRNA表达水平.结果 包装的慢病毒载体感染HSC-T6细胞的效率高于50%;感染HSC-T6细胞后,CTGF的表达在mRNA和蛋白水平均受到明显抑制,其中TS1具有最佳的抑制效率;HSC-T6细胞CTGF基因沉默后,其TIMP-1、TIMP-2和Ⅰ型胶原mRNA水平也显著降低.结论 包装的慢病毒载体在HSC-T6中具有较好的感染效率和CTGF基因沉默效果,基因沉默后可进一步抑制HSC-T6细胞TIMP-1、TIMP-2和Ⅰ型胶原的基因表达,这在抗纤维化的研究中具有积极的意义.
目的 利用RNA榦擾技術,以慢病毒為載體,介導結締組織生長因子(CTGF)基因沉默,併觀察其對下遊基因錶達的影響.方法 用構建的CTGF小榦擾RNA(siRNA)慢病毒轉移質粒與包裝質粒、包膜蛋白質粒共轉染293T細胞,包裝成介導CTGF基因沉默的慢病毒載體;感染肝星狀細胞繫HSC-T6,應用Real-time PCR和Western免疫印跡法篩選基因沉默效率最高的慢病毒載體;再根據綠色熒光蛋白(GFP)錶達水平檢測感染效率;應用Real-time PCR法檢測CTGF基因沉默後HSC-T6中金屬蛋白酶組織抑製劑-1(TIMP-1)、TIMP-2和Ⅰ型膠原mRNA錶達水平.結果 包裝的慢病毒載體感染HSC-T6細胞的效率高于50%;感染HSC-T6細胞後,CTGF的錶達在mRNA和蛋白水平均受到明顯抑製,其中TS1具有最佳的抑製效率;HSC-T6細胞CTGF基因沉默後,其TIMP-1、TIMP-2和Ⅰ型膠原mRNA水平也顯著降低.結論 包裝的慢病毒載體在HSC-T6中具有較好的感染效率和CTGF基因沉默效果,基因沉默後可進一步抑製HSC-T6細胞TIMP-1、TIMP-2和Ⅰ型膠原的基因錶達,這在抗纖維化的研究中具有積極的意義.
목적 이용RNA간우기술,이만병독위재체,개도결체조직생장인자(CTGF)기인침묵,병관찰기대하유기인표체적영향.방법 용구건적CTGF소간우RNA(siRNA)만병독전이질립여포장질립、포막단백질립공전염293T세포,포장성개도CTGF기인침묵적만병독재체;감염간성상세포계HSC-T6,응용Real-time PCR화Western면역인적법사선기인침묵효솔최고적만병독재체;재근거록색형광단백(GFP)표체수평검측감염효솔;응용Real-time PCR법검측CTGF기인침묵후HSC-T6중금속단백매조직억제제-1(TIMP-1)、TIMP-2화Ⅰ형효원mRNA표체수평.결과 포장적만병독재체감염HSC-T6세포적효솔고우50%;감염HSC-T6세포후,CTGF적표체재mRNA화단백수평균수도명현억제,기중TS1구유최가적억제효솔;HSC-T6세포CTGF기인침묵후,기TIMP-1、TIMP-2화Ⅰ형효원mRNA수평야현저강저.결론 포장적만병독재체재HSC-T6중구유교호적감염효솔화CTGF기인침묵효과,기인침묵후가진일보억제HSC-T6세포TIMP-1、TIMP-2화Ⅰ형효원적기인표체,저재항섬유화적연구중구유적겁적의의.
