CAJ | 학술논문

目的用人工合成的耐药相关基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的小分子干扰RNA(siRNA)处理人舌鳞癌顺铂耐药细胞系(Tca8113-CDDP), 探讨对靶基因转录调控的作用效果以及剂量和时间效应关系,为耐药性逆转提供实验依据.方法 CY3荧光素标记阳性对照基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)siRNA,分别于转染后4、24、48、72 h在激光共聚焦显微镜下观察瞬时转染率, 优化转染条件.用SYBR绿色荧光染料法、实时定量PCR技术分析目的基因mRNA的表达情况,同时采用蛋白印迹(Western blot)检测目的基因蛋白水平的表达.四甲基偶氮唑盐法检测cyclin D1 siRNA处理后细胞对顺铂敏感性的影响.结果优化转染条件后,Tca8113-CDDP细胞中CY3 的GAPDH siRNA转染率达90%以上.转染cyclin D1 siRNA 后24、48 h mRNA表达的抑制率为81.6%、80.7%,72 h最为明显,为94.3%.在低于100 nmol/L浓度下,RNA干扰抑制与剂量大小有关;当剂量进一步加大时,抑制效应则维持在"平台期".转染24、48和72 h 后,cyclin D1蛋白的表达也明显下降. siRNA干扰组和对照组细胞在顺铂作用后细胞生长抑制率分别为58.4%、34.8%.结论化学合成的cyclin D1 siRNA在体外实验中,对Tca8113-CDDP细胞中目的基因的沉默提高了细胞对顺铂敏感性,并呈现剂量和时间依赖效应.
목적 용인공합성적내약상관기인세포주기단백D1(cyclin D1)적소분자간우RNA(siRNA)처리인설린암순박내약세포계(Tca8113-CDDP), 탐토대파기인전록조공적작용효과이급제량화시간효응관계,위내약성역전제공실험의거.방법 CY3형광소표기양성대조기인감유철-3-린산탈경매(GAPDH)siRNA,분별우전염후4、24、48、72 h재격광공취초현미경하관찰순시전염솔, 우화전염조건.용SYBR록색형광염료법、실시정량PCR기술분석목적기인mRNA적표체정황,동시채용단백인적(Western blot)검측목적기인단백수평적표체.사갑기우담서염법검측cyclin D1 siRNA처리후세포대순박민감성적영향.결과 우화전염조건후,Tca8113-CDDP세포중CY3 적GAPDH siRNA전염솔체90%이상.전염cyclin D1 siRNA 후24、48 h mRNA표체적억제솔위81.6%、80.7%,72 h최위명현,위94.3%.재저우100 nmol/L농도하,RNA간우억제여제량대소유관;당제량진일보가대시,억제효응칙유지재"평태기".전염24、48화72 h 후,cyclin D1단백적표체야명현하강. siRNA간우조화대조조세포재순박작용후세포생장억제솔분별위58.4%、34.8%.결론 화학합성적cyclin D1 siRNA재체외실험중,대Tca8113-CDDP세포중목적기인적침묵제고료세포대순박민감성,병정현제량화시간의뢰효응.