生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2003年
2期
272-277
,共6页
贾林涛%张立红%于翠娟%纪宗玲%曹云新%王成济%杨安钢
賈林濤%張立紅%于翠娟%紀宗玲%曹雲新%王成濟%楊安鋼
가림도%장립홍%우취연%기종령%조운신%왕성제%양안강
Caspase-3%绿脓杆菌外毒素%细胞凋亡%肿瘤
Caspase-3%綠膿桿菌外毒素%細胞凋亡%腫瘤
Caspase-3%록농간균외독소%세포조망%종류
通过稳定转染人宫颈癌HeLa细胞,建立了野生型caspase-3(wt-casp3),大小亚基序列颠倒的重组caspase-3 (r-casp3),和N端融合绿脓杆菌外毒素(PE)转膜肽段的嵌合重组caspase-3 (cr-casp3)的诱导表达细胞系.蜕皮素诱导后细胞中检测到目的基因的表达,MTT检测和细胞计数结果表明,r-casp3和cr-casp3诱导表达后有效地导致HeLa细胞死亡,通过测定细胞中caspase-3活性,以及细胞周期检测、DNA梯状电泳条带检测(DNA ladder)、电镜观察等证实r-casp3和cr-casp3诱导表达后细胞发生了凋亡,且二者的促凋亡活性相当,而wt-casp3诱导表达细胞并未出现上述效应.结果表明,与野生型caspase-3活化需要上游分子的切割不同,重组caspase-3具有自发的促凋亡活性,而N端PE肽段的融合不影响这种活性,因此PE转膜结构域和重组caspase-3有望参与构建能转膜进入细胞内部,并杀伤细胞的新型肿瘤治疗分子.
通過穩定轉染人宮頸癌HeLa細胞,建立瞭野生型caspase-3(wt-casp3),大小亞基序列顛倒的重組caspase-3 (r-casp3),和N耑融閤綠膿桿菌外毒素(PE)轉膜肽段的嵌閤重組caspase-3 (cr-casp3)的誘導錶達細胞繫.蛻皮素誘導後細胞中檢測到目的基因的錶達,MTT檢測和細胞計數結果錶明,r-casp3和cr-casp3誘導錶達後有效地導緻HeLa細胞死亡,通過測定細胞中caspase-3活性,以及細胞週期檢測、DNA梯狀電泳條帶檢測(DNA ladder)、電鏡觀察等證實r-casp3和cr-casp3誘導錶達後細胞髮生瞭凋亡,且二者的促凋亡活性相噹,而wt-casp3誘導錶達細胞併未齣現上述效應.結果錶明,與野生型caspase-3活化需要上遊分子的切割不同,重組caspase-3具有自髮的促凋亡活性,而N耑PE肽段的融閤不影響這種活性,因此PE轉膜結構域和重組caspase-3有望參與構建能轉膜進入細胞內部,併殺傷細胞的新型腫瘤治療分子.
통과은정전염인궁경암HeLa세포,건립료야생형caspase-3(wt-casp3),대소아기서렬전도적중조caspase-3 (r-casp3),화N단융합록농간균외독소(PE)전막태단적감합중조caspase-3 (cr-casp3)적유도표체세포계.세피소유도후세포중검측도목적기인적표체,MTT검측화세포계수결과표명,r-casp3화cr-casp3유도표체후유효지도치HeLa세포사망,통과측정세포중caspase-3활성,이급세포주기검측、DNA제상전영조대검측(DNA ladder)、전경관찰등증실r-casp3화cr-casp3유도표체후세포발생료조망,차이자적촉조망활성상당,이wt-casp3유도표체세포병미출현상술효응.결과표명,여야생형caspase-3활화수요상유분자적절할불동,중조caspase-3구유자발적촉조망활성,이N단PE태단적융합불영향저충활성,인차PE전막결구역화중조caspase-3유망삼여구건능전막진입세포내부,병살상세포적신형종류치료분자.
