中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2005年
11期
12-15
,共4页
许勇%项佑贵%严兰珍%王龙%徐国江%费俭%傅继粱%王铸钢
許勇%項祐貴%嚴蘭珍%王龍%徐國江%費儉%傅繼粱%王鑄鋼
허용%항우귀%엄란진%왕룡%서국강%비검%부계량%왕주강
人类骨保护素%启动子%报告基因%转基因小鼠
人類骨保護素%啟動子%報告基因%轉基因小鼠
인류골보호소%계동자%보고기인%전기인소서
目的:建立带有人类骨保护素OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型,为OPG体内转录水平的表达调控研究和药物筛选创造条件.方法:将克隆到的人类OPG基因5'端上游6.0kb非翻译序列作为启动子,大肠杆菌编码β-半乳糖苷酶的LacZ基因作为报告基因,构建表达载体pCI-Neo-OPG-LacZ.经显微操作注射到受精卵原核中,经PCR以及Southern印迹杂交鉴定转基因阳性小鼠;用RT-PCR分析LacZ在组织中的表达;利用邻硝基苯-β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)作为底物反应后比色分析组织中的β-半乳糖苷酶活性.结果:构建完成的表达载体pCI-Neo-OPG-LacZ质粒经酶切和测序鉴定序列正确,线性化后显微注射.PCR以及Southern印迹杂交鉴定获得了10只转基因小鼠(Founders),经交配繁育,建立了5个转基因小鼠系,RT-PCR分析表明其中一个系小鼠组织中表达LacZ基因,与内源OPG表达模式一致,组织中可以广泛检测到相应的β-半乳糖苷酶活性.结论:成功建立了人类OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠,为体内研究OPG转录水平的表达及药物筛选提供了理想的动物模型.
目的:建立帶有人類骨保護素OPG基因啟動子驅動報告基因LacZ的轉基因小鼠模型,為OPG體內轉錄水平的錶達調控研究和藥物篩選創造條件.方法:將剋隆到的人類OPG基因5'耑上遊6.0kb非翻譯序列作為啟動子,大腸桿菌編碼β-半乳糖苷酶的LacZ基因作為報告基因,構建錶達載體pCI-Neo-OPG-LacZ.經顯微操作註射到受精卵原覈中,經PCR以及Southern印跡雜交鑒定轉基因暘性小鼠;用RT-PCR分析LacZ在組織中的錶達;利用鄰硝基苯-β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)作為底物反應後比色分析組織中的β-半乳糖苷酶活性.結果:構建完成的錶達載體pCI-Neo-OPG-LacZ質粒經酶切和測序鑒定序列正確,線性化後顯微註射.PCR以及Southern印跡雜交鑒定穫得瞭10隻轉基因小鼠(Founders),經交配繁育,建立瞭5箇轉基因小鼠繫,RT-PCR分析錶明其中一箇繫小鼠組織中錶達LacZ基因,與內源OPG錶達模式一緻,組織中可以廣汎檢測到相應的β-半乳糖苷酶活性.結論:成功建立瞭人類OPG基因啟動子驅動報告基因LacZ的轉基因小鼠,為體內研究OPG轉錄水平的錶達及藥物篩選提供瞭理想的動物模型.
목적:건립대유인류골보호소OPG기인계동자구동보고기인LacZ적전기인소서모형,위OPG체내전록수평적표체조공연구화약물사선창조조건.방법:장극륭도적인류OPG기인5'단상유6.0kb비번역서렬작위계동자,대장간균편마β-반유당감매적LacZ기인작위보고기인,구건표체재체pCI-Neo-OPG-LacZ.경현미조작주사도수정란원핵중,경PCR이급Southern인적잡교감정전기인양성소서;용RT-PCR분석LacZ재조직중적표체;이용린초기분-β-D-반유필남당감(ONPG)작위저물반응후비색분석조직중적β-반유당감매활성.결과:구건완성적표체재체pCI-Neo-OPG-LacZ질립경매절화측서감정서렬정학,선성화후현미주사.PCR이급Southern인적잡교감정획득료10지전기인소서(Founders),경교배번육,건립료5개전기인소서계,RT-PCR분석표명기중일개계소서조직중표체LacZ기인,여내원OPG표체모식일치,조직중가이엄범검측도상응적β-반유당감매활성.결론:성공건립료인류OPG기인계동자구동보고기인LacZ적전기인소서,위체내연구OPG전록수평적표체급약물사선제공료이상적동물모형.
