病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2006年
4期
267-274
,共8页
单纯疱疹病毒%腺相关病毒%辅助病毒
單純皰疹病毒%腺相關病毒%輔助病毒
단순포진병독%선상관병독%보조병독
为了得到一种可以包装AAV2/5和表达绿色荧光蛋白的重组单纯疱疹病毒,设计并构建了一个由AAV2 rep基因和AAV5 cap基因嵌合而成的rep2cap5基因,然后,利用一套携带HSV1基因组的粘粒系统(cos6、cos28、cos14、cos56、cos48),将rep2cap5基因插入cos6粘粒上HSV1基因组片段的UL2基因中,而将EGFP的表达单位插入cos56粘粒上HSV1基因组片段的UL44基因中,用这2个重组粘粒与其它3个粘粒(cos14、cos28、cos48)共转染BHK-21细胞获得了重组病毒HSV1-r2c5-EGFP并进行了空斑纯化.HSV1-r2c5-EGFP病毒能够在BHK-21细胞连续传代,并且可以观察到几乎所有的感染细胞都能产生绿色荧光.用PCR方法以及Southern杂交方法表明所获得的HSV1-r2c5-EGFP中携带有rep2cap5基因,用HSV1-r2c5-EGFP感染携带报告基因LacZ的AAV载体细胞株,获得了具有感染性的重组AAV2/5-LacZ.结果表明,所获得的重组单纯疱疹病毒HSV1-r2c5-EGFP可提供AAV2/5载体包装所需的全部辅助功能,是一种能简便、高效制备重组AAV2/5病毒的通用性辅助病毒.
為瞭得到一種可以包裝AAV2/5和錶達綠色熒光蛋白的重組單純皰疹病毒,設計併構建瞭一箇由AAV2 rep基因和AAV5 cap基因嵌閤而成的rep2cap5基因,然後,利用一套攜帶HSV1基因組的粘粒繫統(cos6、cos28、cos14、cos56、cos48),將rep2cap5基因插入cos6粘粒上HSV1基因組片段的UL2基因中,而將EGFP的錶達單位插入cos56粘粒上HSV1基因組片段的UL44基因中,用這2箇重組粘粒與其它3箇粘粒(cos14、cos28、cos48)共轉染BHK-21細胞穫得瞭重組病毒HSV1-r2c5-EGFP併進行瞭空斑純化.HSV1-r2c5-EGFP病毒能夠在BHK-21細胞連續傳代,併且可以觀察到幾乎所有的感染細胞都能產生綠色熒光.用PCR方法以及Southern雜交方法錶明所穫得的HSV1-r2c5-EGFP中攜帶有rep2cap5基因,用HSV1-r2c5-EGFP感染攜帶報告基因LacZ的AAV載體細胞株,穫得瞭具有感染性的重組AAV2/5-LacZ.結果錶明,所穫得的重組單純皰疹病毒HSV1-r2c5-EGFP可提供AAV2/5載體包裝所需的全部輔助功能,是一種能簡便、高效製備重組AAV2/5病毒的通用性輔助病毒.
위료득도일충가이포장AAV2/5화표체록색형광단백적중조단순포진병독,설계병구건료일개유AAV2 rep기인화AAV5 cap기인감합이성적rep2cap5기인,연후,이용일투휴대HSV1기인조적점립계통(cos6、cos28、cos14、cos56、cos48),장rep2cap5기인삽입cos6점립상HSV1기인조편단적UL2기인중,이장EGFP적표체단위삽입cos56점립상HSV1기인조편단적UL44기인중,용저2개중조점립여기타3개점립(cos14、cos28、cos48)공전염BHK-21세포획득료중조병독HSV1-r2c5-EGFP병진행료공반순화.HSV1-r2c5-EGFP병독능구재BHK-21세포련속전대,병차가이관찰도궤호소유적감염세포도능산생록색형광.용PCR방법이급Southern잡교방법표명소획득적HSV1-r2c5-EGFP중휴대유rep2cap5기인,용HSV1-r2c5-EGFP감염휴대보고기인LacZ적AAV재체세포주,획득료구유감염성적중조AAV2/5-LacZ.결과표명,소획득적중조단순포진병독HSV1-r2c5-EGFP가제공AAV2/5재체포장소수적전부보조공능,시일충능간편、고효제비중조AAV2/5병독적통용성보조병독.
